[发明专利]一种食源性致病菌单增李斯特菌PCDR法检测试剂

摘要

本发明涉及食源性致病菌单增李斯特菌PCDR法检测试剂，可有效解决高灵敏度PCDR法快速、准确检测食源性致病菌单增李斯特菌的问题，方法是，由以下组分：SD缓冲液、dNTPs、Mg2+、1对上、下游内引物、1对上、下游外引物，SD DNA聚合酶，加超纯水混匀制成；使用时：将单增李斯特菌的基因组DNA溶解在ddH₂O中，取DNA和本发明检测试剂混合在一起，在EP管中混匀；将反应管放置于PCR仪中反应、预变性、退火、延伸，循环，再琼脂糖凝胶电泳检测，即可实现PCDR法对食源性致病菌单增李斯特菌的检测。本发明组分科学合理，易生产制备，使用方便，能够快速、灵敏、特异性检测食源性致病菌单增李斯特菌，确保食品安全，有显著的经济和社会效益。

主权项

1.一种食源性致病菌单增李斯特菌PCDR法检测试剂，其特特征在于，由以下组分：SD缓冲液100mL、dNTPs 2.5mmol、Mg2+ 3mmol、1对内引物，包括内上、下游引物各400nmoL，1对外引物，包括外上、下游引物各200nmoL，SD DNA聚合酶80U，加超纯水至1000mL混匀制成；所述的1对内引物的核苷酸序列为SEQ ID No:3(LM‑1（NO.1044‑1063）, CGGAGGTTCCGCAAAAGATG)和SEQ ID No:4(LM‑2（NO.1277‑1258）, CCTCCAGAGTGATCAATATT)的引物，来自于食源性致病菌单增李斯特菌的hemolysin基因；所述的1对外引物的核苷酸序列SEQ ID No:1(F1（NO.820‑841），GTTACTAAAGAGCAGTTGCAAG)和SEQ ID No:2(R1（NO.1462‑1644）R1，CTAAACCAGTGCATTCTTTAGCG)，来自于食源性致病菌单增李斯特菌的hemolysin基因；使用时，按照商业化细菌基因组提取试剂盒提取单增李斯特菌的基因组DNA，溶解在50ulddH2O中，取1ulDNA和24ul该检测试剂混合在一起，在200ulEP管中混匀；将反应管放置于PCR仪中，反应条件为：92℃预变性2min；92℃变性30s，50℃退火20s，72℃延伸20s，30个循环；72℃ 延伸5min，取5ul反应产物进行质量浓度1%琼脂糖凝胶电泳检测。