[发明专利]条件性敲除lncRNA DLX6-os1转基因小鼠的培育方法

摘要

本发明涉及条件性敲除lncRNA DLX6‑os1转基因小鼠的培育方法，有效解决作为动物模型，适用于不同组织器官中研究该lncRNA的作用问题，构建Dlx6‑os1条件敲除载体，Dlx6‑os1基因，转录物：Dlx6‑os1‑201 ENSMUST00000159568.5，位于小鼠6号染色体上的三个外显子，以三个外显子作为条件敲除区域；将C57BL/6小鼠基因文库中RP24‑276P7 and RP24‑260F14的BAC克隆作为模板，进行PCR；在目的载体中，Neo位点旁插入自删除锚定位点，基因敲除区域旁插入loxP位点，DTA阴性选择；与Cre酶介导的基因重组，得基因敲除质粒载体；将基因敲除质粒载体导入ES细胞中，与多种不同器官带有Cre酶的转基因小鼠杂交，得到在不同器官中降低DLX6‑os1表达水平的阳性小鼠。本发明适用于在不同组织器官中研究该lncRNA的作用，开拓了对糖尿病诊断治疗的新途径。

主权项

1.一种条件性敲除lncRNA DLX6‑os1转基因小鼠的培育方法，其特征在于，通过基因工程技术对C57小鼠进行基因改造，构建出FLOX‑DLX6‑os1转基因小鼠，此小鼠可与多种不同器官带有cre酶的转基因小鼠杂交，得到在不同器官中降低DLX6‑os1表达水平的小鼠，具体是：（1）、构建载体构建Dlx6‑os1条件敲除载体，Dlx6‑os1基因，转录物：Dlx6‑os1‑201 ENSMUST00000159568.5，位于小鼠6号染色体上的三个外显子，以三个外显子作为条件敲除区域，删除该区域应导致小鼠Dlx6‑os1基因功能丧失；将C57BL / 6小鼠基因文库中RP24‑276P7 and RP24‑260F14的BAC克隆作为模板，进行PCR，获得试验所需要的目的载体及敲除区域；在目的载体中，Neo位点旁插入自删除锚定位点，基因敲除区域旁插入loxp位点，DTA用于阴性选择；与Cre酶介导的基因重组后，得构建成功的基因敲除质粒载体；（2）、基因动物打靶培育：将C57bl/6 ES细胞用于基因打靶，也就是将基因敲除质粒载体导入ES细胞中，进行后续繁育，与多种不同器官带有Cre酶的转基因小鼠杂交，得到在不同器官中降低DLX6‑os1表达水平的阳性小鼠。