[发明专利]一种适用于鲍曼不动杆菌毒力的检测方法

摘要

本发明涉及一种适用于鲍曼不动杆菌毒力的检测方，属于生物检测技术领域。以鲍曼不动杆菌内一段特异性序列作为标志物，该特异性序列存在于鲍曼不动杆菌内一段包括19个开放读码框的基因序列中，而该段包括19个开放读码框的基因序列为高毒力的鲍曼不动杆菌特有的；再以标志物特异性序列设计引物，最后基于聚合酶链反应，完成对鲍曼不动杆菌的高毒力或低毒力的定性检测，以弥补现有技术中鲍曼不动杆菌检测方法只能鉴定鲍曼不动杆菌的存在，无法准确、定性的区分各个菌株不同毒力等问题，从而保证了鲍曼不动杆菌毒力的检测标志物、检测方法的应用价值。

主权项

1.一种适用于鲍曼不动杆菌毒力的检测方法,其特征在于，包括如下步骤：S1：取至少四个PCR管，并分别编号为阳性对照管、阴性对照管、实验管及空白对照管，配制20µL 的PCR扩增体系；其中，阳性对照管中加入15～18uL PCR反应液、0.5～1.5uL上游引物、0.5～1.5uL下游引物及1～2uL阳性对照；阴性对照管中加入15～18uL PCR反应液、0.5～1.5uL上游引物、0.5～1.5uL下游引物及1～2uL阴性对照；实验管中加入15～18uL PCR反应液、0.5～1.5uL上游引物、0.5～1.5uL下游引物及1～2uL待检测的鲍曼不动杆菌样品；空白对照管中加入15～18uL PCR反应液、0.5～1.5uL上游引物、0.5～1.5uL下游引物及1～2uL灭菌水；所述上游引物序列为：5’‑TTGAGAAGCTAAATTATGGCTCG‑3’，所述下游引物序列为：5’‑GATAGCACAGAAATCCATAAAGGAA‑3’；S2：将经步骤S1所得的PCR扩增体系分别在转速为3000rpm的条件下，离心30s，再放置于PCR仪中扩增；S3：将经步骤S2扩增反应后的产物分别进行电泳，观测91bp处对应是否出现条带，并作结果分析。