[发明专利]一种鸭小肠上皮细胞的培养方法及应用

摘要

本发明公开了一种鸭小肠上皮细胞的培养方法及应用，属于细胞分离培养技术领域及细胞毒理技术领域。本发明的细胞培养方法结合酶消化和组织块吹打的方法获取鸭小肠上皮原代细胞，克服了现有方法培养鸭原代小肠上皮细胞活力低，无法进行细胞转染的问题，原代细胞培养成功，细胞纯度达到95%以上，成功建立了鸭小肠上皮细胞培养方法；且利用培养的原代鸭小肠上皮细胞，通过时效和量效试验，测试双氧水浓度和作用时间对细胞活力和细胞凋亡情况的影响，确定了适于小肠上皮细胞的造模方案，建立了鸭原代小肠上皮细胞氧化应激模型，为以后研究鸭肠道损伤的分子机制提供基础。

主权项

1.一种鸭小肠上皮细胞的培养方法，其特征在于：该培养方法包括如下步骤：步骤1，取孵化26天的麻鸭种蛋，无菌操作取出鸭胚小肠组织，置于DPBS中；步骤2，去除组织中的小肠系膜和胰腺后，将小肠剖开再次用DPBS漂洗，洗至上清液清亮，将小肠剪碎后备用；步骤3，采用1mg/ml的I型胶原酶消化剪碎的组织团块，37℃，80 r/min振荡消化70min；步骤4，使用DPBS轻柔清洗消化后的组织团块2次，弃除DPBS，保留组织块；步骤5，37℃ 的DPBS轻轻吹打清洗后的组织团块，收集上层细胞悬浮液，保留组织块继续使用DPBS清洗，重复本步骤7‑8次，直至上清液清亮；步骤6，收集获得的细胞悬浮液1000 r/min离心3 min，弃上清；步骤7，离心获得的细胞团用完全培养基培养吹打重悬，过100μm网筛过滤；步骤8，过筛后的细胞轻轻吹打均匀后，将其接种到细胞培养瓶中，37℃，5% CO₂条件下培养90min，去掉贴壁细胞；步骤9，收集未贴壁细胞，细胞按照10×10⁶/mL密度接种于细胞培养板，37℃，5% CO₂培养24小时。