[发明专利]一种黄山贡菊提取物的体外美白功效评价方法

摘要

本发明提供了一种黄山贡菊提取物的体外美白功效评价方法，其特征在于，包括将黄山贡菊提取物作用于B10‑F10细胞，检测提取物对细胞活性及细胞黑色素含量的影响，评价提取物美白活性。通过该评价方法可得低浓度的黄山贡菊提取物对B16‑F10细胞几乎无毒性；细胞经黄山贡菊提取物处理48h后，黑色素生成被显著抑制，且呈剂量依赖效果。黄山贡菊提取物具有美白活性，有望用于美白化妆品领域。

主权项

1.一种黄山贡菊提取物的体外美白功效评价方法，其特征在于，包括：第一步：将黄山贡菊提取物作用于B10‑F10细胞，检测提取物对细胞活性的影响，具体步骤包括：步骤1‑1：取对数生长期B10‑F10细胞，经消化后，收集细胞并用培养基制备成单细胞悬液；步骤1‑2：将步骤1‑1所得的单细胞悬液接种于培养板中分别作为空白组、样品处理组，置于培养箱中培养；步骤1‑3：用培养液分别配置含不同浓度黄山贡菊提取物的培养液；步骤1‑4：将步骤1‑2所得的培养物弃上清液，在步骤1‑2中的样品处理组分别加入含不同浓度黄山贡菊提取物的培养液，空白组不加药物，以等量的培养液代替，置于培养箱中继续培养；步骤1‑5：每孔加入MTT溶液，将细胞置于培养箱中继续培养；步骤1‑6：弃去培养液和MTT溶液，加入二甲基亚砜，振荡，用酶标仪检测波长570nm和680nm下各孔的OD值；步骤1‑7：计算细胞的增殖率；第二步：将黄山贡菊提取物作用于B10‑F10细胞，检测提取物对细胞黑色素含量的影响，具体步骤包括：步骤2‑1：取对数生长期B10‑F10细胞，经消化后，收集并用培养基制备成单细胞悬液；步骤2‑2：将步骤2‑1所得的单细胞悬液接种于培养板中，分别作为空白组、样品处理组和曲酸处理组，置于培养箱中培养；步骤2‑3：配制含有不同浓度黄山贡菊提取物的培养液及含有曲酸的培养液；步骤2‑4：将步骤2‑2中所得的培养物弃上清液，步骤2‑2中的样品处理组分别加入步骤2‑3所得的含有不同浓度黄山贡菊提取物的培养液，曲酸处理组加入含有曲酸的培养液，空白组不加药物，以等量的培养液代替，置于培养箱中继续培养；步骤2‑5：将步骤2‑4中所得的培养物弃上清，各孔加入磷酸盐缓冲液洗一次，消化，加入完全培养基终止消化；步骤2‑6：将步骤2‑5中消化所得的细胞悬液转移至离心管，离心，弃上清；步骤2‑7：加入PBS重悬步骤2‑6所得的细胞，将重悬后的细胞两等分，离心，弃上清；步骤2‑8：取一份细胞加入含5‑15％DMSO的0.1‑1.5mol/L NaOH溶液，60‑100℃水浴20‑60min后，移入培养板中，用酶标仪测定波长405nm处各孔的吸光度；步骤2‑9：用PBS配制不同浓度的蛋白质标准品溶液；采用0.1％‑10％Triton X‑100溶液裂解另外一份细胞；步骤2‑10：取步骤2‑9中所得的不同浓度的蛋白质标准品溶液和裂解后的细胞分别加入染色液，用酶标仪测定波长595nm各孔的吸光度；步骤2‑11：绘制标准曲线，计算出样品中的蛋白浓度；步骤2‑12：计算细胞内黑色素的含量。