[发明专利]铜-64标记DNA单链的方法在审

专利信息
申请号: 201910484473.6 申请日: 2019-06-05
公开(公告)号: CN110128495A 公开(公告)日: 2019-08-16
发明(设计)人: 李剑波;段晓燕;都义日;翁兆平;王涛 申请(专利权)人: 李剑波
主分类号: C07H21/04 分类号: C07H21/04;C12Q1/6806;A61K51/04;A61K103/00
代理公司: 北京彭丽芳知识产权代理有限公司 11407 代理人: 彭丽芳
地址: 010050 内蒙古自*** 国省代码: 内蒙古;15
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摘要: 发明公开了一种铜‑64标记DNA单链的方法,包括如下步骤:将ssDNA与螯合剂p‑SCN‑Bn‑NOTA进行偶联;将2mCi溶于0.1M HCl溶液的铜‑64,与100μL的醋酸钠溶液混匀,加入500μL的NOTA‑ssDNA,在37℃下反应1小时,在反应期间,放射性标记率通过薄层色谱检测,反应结束后,得到的混合物通过NAP‑5脱盐柱进行纯化,0.05M的乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相,得到纯化的目标产物64Cu‑ssDNA。利用本发明所得的铜‑64标记DNA单链与不同结构的含有手臂链的DNA多面体混合杂交,可以制备出不同结构的铜‑64标记DNA多面体,从而实现PET分子探针的制备。
搜索关键词: 标记DNA 单链 多面体 制备 乙二胺四乙酸钠溶液 薄层色谱检测 醋酸钠溶液 放射性标记 分子探针 混合杂交 目标产物 混合物 流动相 手臂链 脱盐柱 螯合剂 混匀 偶联
【主权项】:
1.铜‑64标记DNA单链的方法,其特征在于:包括如下步骤:S1、将ssDNA与螯合剂p‑SCN‑Bn‑NOTA进行偶联首先对ssDNA的5’端进行氨基修饰;然后将一定量的氨基修饰ssDNA溶解于磷酸盐缓冲液中,配成0.1mM的ssDNA溶液;再量取0.5mg p‑SCN‑Bn‑NOTA粉末溶解在DMSO中,将其加入ssDNA溶液中,并使用碳酸钠缓冲液调节pH至8.5‑9.0;将反应溶液在室温下持续振荡2小时,反应结束后,利用NAP‑5脱盐柱对反应溶液进行纯化,1xPBS作为洗脱缓冲液,得到纯化后的偶联NOTA的ssDNA,即NOTA‑ssDNA;S2、将2mCi溶于0.1M HCl溶液的铜‑64,与100μL的醋酸钠溶液混匀,加入500μL的NOTA‑ssDNA后,在37℃下反应1小时,在反应期间,放射性标记率通过薄层色谱检测,反应结束后,得到的混合物通过NAP‑5脱盐柱进行纯化,0.05M的乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相,得到纯化的目标产物64Cu‑ssDNA。
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