[发明专利]一种TGFβR1（T204D）酶活性的快速检测方法及其应用在审
| 申请号： | 201910485810.3 | 申请日： | 2019-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN110196326A | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 石榴;徐燕华 | 申请（专利权）人： | 武汉合研生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/573 | 分类号： | G01N33/573 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种TGFβR1(T204D)酶活性的快速检测方法及其应用。检测方法为：(1)取待测样品、空白对照品、阳性对照品分别与TGFβR1(T204D)酶、TGFβR1底物/ATP混合液共孵育进行激酶反应产生ADP；(2)向步骤(1)的三组激酶反应体系中分别添加ADP‑GloTM反应试剂共孵育，终止激酶反应并消耗完剩余ATP；(3)向步骤(2)的三组反应体系中分别添加激酶检测试剂共孵育，使ADP转化成ATP，并读取新合成的ATP的发光值RLU；(4)按酶活＝(RLU(Sample)‑RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)‑RLU(Blank))×100％计算TGFβR1(T204D)酶活。该方法基于ADP‑GloTM激酶实验，直接测定反应中消耗的ATP来定量反应的进程。完成全部实验只需一天，大大缩短了检测时间。该方法可应用于TGFβR1(T204D)受体抑制剂和此靶点相关的抗肿瘤药物的筛选。 | ||
| 搜索关键词： | 激酶反应 共孵育 快速检测 激酶 酶活性 酶活 应用 读取 生物化学技术 抗肿瘤药物 受体抑制剂 阳性对照品 消耗 待测样品 反应试剂 检测试剂 空白对照 直接测定 混合液 新合成 检测 靶点 底物 发光 筛选 转化 进程 | ||
【主权项】：
1.一种TGFβR1(T204D)酶活性的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待测样品、空白对照品、阳性对照品分别与TGFβR1(T204D)酶试剂、TGFβR1底物/ATP混合液共孵育进行激酶反应产生ADP；(2)向步骤(1)的三组激酶反应体系中分别添加ADP‑GloTM反应试剂共孵育，终止激酶反应并消耗完剩余ATP；(3)向步骤(2)的三组反应体系中分别添加激酶检测试剂共孵育，使ADP转化成ATP，并读取新合成的ATP的发光值RLU；(4)按酶活＝(RLU(Sample)‑RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)‑RLU(Blank))×100％计算TGFβR1(T204D)酶的活性；其中RLU(Pos.Ctrl)为空白对照品与TGFβR1(T204D)激酶反应的激酶读值，RLU(Blank)为待测样品中未添加TGFβR1(T204D)时激酶读值。
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