[发明专利]一种适用于虾脊兰属植物的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液

摘要

本发明公开了一种适用于虾脊兰属植物的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液，涉及流式细胞术检测领域。本发明公开的适用于虾脊兰属植物的流式细胞术样品的制备方法，包括裂解步骤将组织样品进行裂解处理、过滤处理、离心处理，得到待染色的细胞核染色步骤对所述待染色的细胞核进行染色处理，得到染色的细胞核。该制备方法采用改进的细胞裂解缓冲液处理组织样品，其能够去除虾脊兰属植物中完整的细胞核中残留的细胞质碎片，保持细胞核在悬浮液中的稳定并阻止凝集，并提供合适的环境用来进行专一的核化学染色，有效地降低胞质成分对染色的负面影响。

主权项

1.一种适用于虾脊兰属植物的流式细胞术样品的制备方法，其特征在于，包括裂解处理和染色处理，具体包括以下步骤：（1）取虾脊兰属植物的叶片50mg，放入盛有1‑5ml预冷的细胞裂解缓冲液的5.5cm的培养皿中，用锋利的刀片将叶片切为碎片，整个过程在冰袋上操作且保证叶片始终浸没在裂解液中，得到细胞核悬浮液，静置5min；（2）将细胞核悬浮液用400目尼龙网过滤，得到细胞核滤液，取1ml细胞核滤液移至一次性2ml塑料离心管中；（3）将细胞核滤液进行离心处理，弃上清液保留沉淀，加入1ml的裂解液重新悬浮；（4）向步骤（3）悬浮液中加入50ul的RnaseA和50ul的PI染料，混匀，在4℃黑暗处静置过夜，得到染色的细胞核；（5）将染色的细胞核在流式细胞仪中进行检测和分析；步骤（1）所述裂解步骤中采用的细胞裂解缓冲液包括如下组分：45 mmol /L MgCl₂，30 mmol /L Sodium citrate，20 mmol /L MOPS，0.1 %V/V TritonX‑100，1%PVP‑10，0.5% V/V Tween20，pH 7.0，4℃保存。