[发明专利]一种控制氧化铁纳米粒子在动物脑内分布及其荧光检测方法

摘要

本发明公开了一种控制氧化铁纳米粒子在动物脑内分布及其荧光检测方法。本发明的目的是提供一种将链霉亲和素(SA)修饰的氧化铁纳米粒子分布于事先注入生物素的动物脑细胞膜表面的方法。将荧光素FITC结合的SA修饰在氧化铁纳米粒子表面标记氧化铁纳米粒子使其在相应激发光下呈绿色荧光，用AVV‑DIO‑ChR2‑mCherry特异性转染多巴胺能神经元使其在相应激发光下呈红色荧光。利用激光共聚焦显微镜的明场像及荧光成像观察到氧化铁纳米粒子在细胞膜上的分布。本发明通过简单地向黑质提供微量生物素的方法，使SA修饰的纳米粒子附着在细胞膜上的量明显增加，并用荧光成像方法检测了纳米粒子在体内附着于细胞膜上。

主权项

1.一种控制氧化铁纳米粒子在动物脑内分布及其荧光检测方法，其特征在于具体步骤为：(1)将15g聚乙二醇(PEG)和0.3g聚乙烯亚胺(PEI)加入50mL三口烧瓶中，以乙酰丙酮铁(Fe(acac)₃)为铁源，将回流时间和温度分别设置为1h和200‑320℃，反应结束后先使用甲苯再使用丙酮依次清洗，清洗完毕后分散在去离子水中，并使用LS磁珠分选柱滤去残留的聚合物以及甲苯、丙酮，得到聚乙烯亚胺修饰的氧化铁纳米粒子(PEI‑SPIONs)；(2)将13.2mg1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和10.0mg N‑羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐溶于2mL 0.01M PH为7.2～7.4的PBS缓冲液中，然后加入浓度为1mg/mL的40μL‑120μL FITC‑SA，避光环境下活化10min，随后加入2μLβ‑巯基乙醇以避免蛋白质交联，然后将混合液加入浓度为2mg/mL的2mL的PEI‑SPIONs中，在摇床内，在转速100r/min，温度25℃反应3h，使用LS磁珠分选柱除去游离的FITC‑SA，用0.01M PBS缓冲液彻底洗涤，重复三次，可得到FITC‑SA/PEI‑SPIONs，将其置于4℃冷藏柜中保存待使用；(3)将AVV‑DIO‑ChR2‑mCherry借助立体定位仪注入小鼠黑质，注射总量为150‑300nL，特异性转染多巴胺能神经元使其在相应激发光下呈红色荧光；(4)将200‑400nL浓度为1mg/mL溶解在人工脑脊液(ACSF)中的生物素，借助立体定位仪将电极缓缓插入黑质坐标位置；(5)注射生物素24h之后，将500nL的分散于pH为7.2～7.4、浓度0.01M的PBS中浓度为1mg/mL的FITC‑SA/PEI‑SPIONs的分散液，借助立体定位仪将电极缓缓插入大鼠左侧黑质部位。