[发明专利]一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法有效
| 申请号： | 201910520818.9 | 申请日： | 2019-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN110195078B | 公开（公告）日： | 2020-09-11 |
| 发明（设计）人： | 宋培玲;皇甫海燕;李子钦;吴晶;史志丹;燕孟娇;郭晨;皇甫九茹;贾晓清;郝丽芬;魏晓军;郭建靖;杨永青 | 申请（专利权）人： | 内蒙古自治区农牧业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/65 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 董大媛 |
| 地址： | 010031 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： |
本发明提供了一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法，属于植物病原真菌遗传转化技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将含质粒pCHs‑GFP的农杆菌接种于LB液体培养基中培养，后转入含有150～250μg/mL乙酰丁香酮的CM液体培养基中重悬获得农杆菌菌液；2)收集油菜黑胫病菌的分生孢子与无菌水混合制备浓度为(0.5～9)×10 |
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| 搜索关键词： | 一种 杆菌 油菜 病菌 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法，包括以下步骤：1)将含质粒pCHs‑GFP的农杆菌接种于LB液体培养基中培养至菌液的OD600为0.5～0.7后，转入含有150～250μg/mL乙酰丁香酮的CM液体培养基中重悬获得农杆菌菌液；2)收集油菜黑胫病菌Leptosphaeria biglobosa的分生孢子与无菌水混合制备浓度为(0.5～9)×106个/mL的分生孢子悬浮液；3)将所述农杆菌菌液与分生孢子悬浮液混合，共培养3～4d后，转移至筛选培养基，筛选培养7～15d获得转化子；所述质粒pCHs‑GFP上包括潮霉素抗性基因、GFP绿色荧光蛋白基因和卡那抗性基因；步骤1)和步骤2)之间无时间顺序限定。
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