[发明专利]一种利用生物发光报告系统判定抗生素作用机制的方法

摘要

本发明公开了一种利用生物发光报告系统判定抗生素作用机制的方法。是使用生物发光报告系统制备金黄色葡萄球菌lux报告株，在含有该菌株的琼脂糖双层平板上排布待检含有抗生素的溶液的滤纸片，培养并获得发光图片，将发光图片转化为发光曲线，提取发光曲线特征同已知抗生素特征发光曲线比对进行层级聚类，若所检测抗生素发光曲线和已知作用机制的抗生素的发光曲线聚类在一起，则判定待检的抗生素作用机制与已知作用机制的抗生素相同。本发明方法可实现对抗生素作用机制的判定，降低抗生素作用机制鉴定的成本，提高抗生素作用机制类鉴定的速度，提高抗生素筛选的能力，应用前景广阔。

主权项

1.一种利用生物发光报告系统判定抗生素作用机制的方法，步骤是：(1)使用生物发光报告系统制备金黄色葡萄球菌lux报告株；其中，所述发光报告系统由pAmilux‑clpX‑luxABCDE质粒、pAmilux‑dnaJ‑luxABCDE质粒、pAmilux‑dnaK‑luxABCDE质粒、pAmilux‑groE‑luxABCDE质粒组成；所述pAmilux‑clpX‑luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述pAmilux‑dnaJ‑luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述pAmilux‑dnaK‑luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述pAmilux‑groE‑luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述金黄色葡萄球菌lux报告株是由四种质粒pAmilux‑clpX‑luxABCDE质粒、pAmilux‑dnaJ‑luxABCDE质粒、pAmilux‑dnaK‑luxABCDE质粒、pAmilux‑groE‑luxABCDE质粒分别转化入金黄色葡萄球菌中，制成的四株金黄色葡萄球菌报告株，分别命名为：报告菌株S1、报告菌株S2、报告菌株S3、报告菌株S4；(2)制备含有四株金黄色葡萄球菌报告株的琼脂糖双层平板，将灭菌的滤纸片在琼脂糖双层平板中央或培养基表面有序排布并与培养基紧密相贴；(3)将待检含有抗生素的溶液滴加到滤纸片上，继续培养并拍摄细菌发光图片；(4)将发光图片转化为发光曲线，提取发光曲线特征同已知抗生素特征发光曲线比对进行层级聚类，若所检测抗生素发光曲线和已知作用机制的抗生素的发光曲线聚类在一起，则判定待检的抗生素作用机制与已知作用机制的抗生素相同。