[发明专利]一种检测单碱基突变的方法及应用

摘要

本发明涉及基因检测技术领域，本发明公开了一种检测单碱基突变的方法，包括DNA的提取、DNA的分离、DNA的纯化、DNA的分析、NDA的扩增以及DNA的检测。本发明对DNA的提取便捷，同时DNA的纯度能够有效的得到保障，且检测的效果明显，能够了解自身是否有家族性疾病的致病基因，预测患病风险，采用基因诊断的方法，不仅敏感性大大提高，而且在短时间内就能得到结果，能够正确选择药物，避免滥用药物和药物不良反应：根据基因检测的结果，可制定特定的治疗方案，从而科学地指导使用药物，避免药物毒副反应。

主权项

1.一种检测单碱基突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、DNA的提取：提取少量的动物或植物组织，放入杀菌消毒后的试管中，向试管中加入裂解溶液，将试管放置在高速离心机上离心，时间控制在5‑10分钟；S2、DNA的分离；S3、DNA的纯化：在S2完成后，向试管内加入60％‑70％的乙醇溶液以及浓度为10％‑20％的TE溶液，并将试管放置在高速离心机内，高速离心3‑5分钟，取试管内的下层溶液；S4、DNA的分析；S5、NDA的扩增：在DNA的试液中加入CRS引物，经过PCR扩增之后，其中“GCCG”为Hhal的酶切识别位点，从而使用CRS‑PCR引物扩增等位基因时，在PCR的产物中就能够就形成了可由Hhal识别的酶切位点，酶切后每个等位基因的片段长度均不相等；S6、DNA的检测：具体包括如下步骤：M1、双链DNA分子采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其由于迁移行为决定于其分子大小和电荷，不同长度的DNA片段能够在聚丙烯酰胺凝胶基础上被区分开；M2、加入了尿素和甲酰胺的混合溶液组成的变性剂梯度，从而能够把同样长度但序列不同的DNA片段区分开来一个特定的DNA片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为一个几百个碱基对的DNA片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成；M3、当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度，该区域这一段连续的碱基对发生解链，浓度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链，直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链DNA完全解链从而双链DNA完全解链；M4、不同DNA片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，从而双链DNA完全解链，如果不同DNA片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，DNA片段中每个碱基处的序列差异都能被区分开；