[发明专利]一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法

摘要

本发明涉及一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法,大叶金腰Chrysosplenium macrophyllum Oliv.是一种低矮的常绿草本，因含有黄酮类而具有重要药用开发价值。本发明公开一种适合大叶金腰染色体核型分析的制片方法，包括从大叶金腰新鲜植株获取根尖、预处理、固定、前低渗、酶解去壁、后低渗、涂片和染色、镜检和观察的过程。本发明提供一种简单适用的大叶金腰染色体核型分析制片方法，为大叶金腰的后续科学研究提供帮助，为金腰属植物的分类及开发应用研究奠定基础。

主权项

1.一种金腰染色体制片方法，具体步骤为:(1)获取根尖：取生长茂盛的金腰植株的根尖；(2)预处理：将根尖置于4℃冰箱中进行预处理2‑3h；(3)固定：将预处理后的根尖投入盛有固定液中进行固定保存；(4)前低渗：取出根尖，置于重蒸水中处理40min；(5)酶解去壁：加入2％混合酶0.2mL，然后放入28℃水浴锅中水浴4.5h，所述混合酶为4％纤维素酶与4％果胶酶等体积混合。(6)后低渗：吸去酶液，用重蒸水清洗根尖，置于重蒸水中进行低渗水浴28℃，40min左右；(7)敲片和染色：取低渗后的根尖进行敲片处理，并放入有改良吉姆萨染液的染缸中染色40min，所述改良吉姆萨染液的配方为：先由吉姆萨粉末与甘油按照质量体积比2:1研磨混合制成母液，实验取用时将吉姆萨母液与磷酸盐缓冲液按体积比1：20进行；(8)镜检观察。