[发明专利]一种血红蛋白偶联物的制备方法

摘要

本发明涉及生物制药技术领域，特别涉及一种血红蛋白偶联物的制备方法。该制备方法包括如下步骤：分离红血球、溶血、分离血红蛋白与细胞膜基质、层析纯化、修饰反应、灭活病毒、超滤换液层析。该制备方法解决了急性失血及失血性休克的用药问题，缓解了血源短缺的现状；使用时无需适配血型，保存期长，由于制备过程中采用严格的病毒灭活工艺，杜绝了人畜共患病毒的污染，产品直接填补国际空白市场；实现规模化生产。

主权项

1.一种血红蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：分离红血球：将牛血在低温冷冻条件下进行离心，得到红血球；溶血：在氮气保护、4～8℃条件下，往溶血罐内加入4～8倍红血球重量的、pH为7.4±0.1、渗透压130±10mOsm的低渗溶液，搅拌60～100min，得到溶血后溶液；分离血红蛋白与细胞膜基质：将溶血后溶液进行切向流过滤，除红血球残骸；层析纯化：超滤浓缩换阴离子层析液，当血红蛋白含量达到11～13g/dL时停止超滤，得到超滤后溶液；将超滤后溶液进行阴离子交换层析，去除磷脂、杂蛋白；修饰反应：除病毒，超滤浓缩换修饰液至血红蛋白初始浓度为5.0±0.2g/dL，得到血红蛋白溶液；将血红蛋白溶液与单甲氧基聚乙二醇修饰液混合，在pH值pH8.6±0.1、温度4～10℃条件下进行修饰反应，修饰反应的时间为50～70min，终止反应，得到血红蛋白偶联物溶液；灭活病毒：对血红蛋白偶联物溶液进行巴氏灭活；超滤换液层析：将巴氏灭活后的血红蛋白偶联物溶液进行超滤浓缩换阳离子层析液；将超滤浓缩换液后的血红蛋白偶联物溶液进行阳离子交换层析、超滤浓缩换配方液、除菌过滤，得到血红蛋白偶联物。