[发明专利]一种利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性的方法

摘要

本发明公开了一种利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性的方法，包括番茄离体叶片采集，叶霉病菌的培养和孢子悬浮液配制，离体叶片接种和病情调查等步骤。本发明主要利用培养的叶霉病病原菌，在番茄材料离体叶片上进行接种，以鉴定番茄材料对该病原菌的抗性。该方法在室内利用一片离体叶片，就可以鉴定材料的抗病性，操作简单，可控性好，效率高，是一种简便有效的接种鉴定方法。通过该方法能科学高效准确地鉴定出不同番茄材料对叶霉病的抗性。

主权项

1.一种利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）番茄离体叶片采集：种植不同材料番茄，待生长至5~6叶期，剪取生理状态一致的植株新叶大小5~7cm的叶片，用洗洁精水漂洗2 min后，用自来水冲洗干净，再用无菌水漂洗2次，备用；（2）叶霉病病原菌培养和孢子悬浮液配制：从本地番茄田间典型发病植株采集叶霉病叶在PDA培养基分离纯化获得番茄叶霉病病原菌，并置于23℃恒温培养箱中培养；将培养 25~28天的成熟菌落，加无菌水用涂布棒刮擦菌落，双层纱布过滤，10000 r/min 离心 2 min 沉淀孢子，弃上清液，加无菌水，用血球计数板计数，配制成5×10⁶浓度的孢子悬浮液；（3）离体番茄叶片孢悬液接种法：将上述备用的番茄离体叶片在含叶霉病病原菌孢子5×10⁶浓度的孢子悬浮液中浸泡30 min ，然后取出放置于铺有保湿滤纸的瓷盘内，用灭菌的含有0.2g/L苯并咪唑的湿脱脂棉包裹接种叶柄保湿，并用透明的保鲜膜封严瓷盘进行保湿培养，置于光照培养箱中，模拟田间光照及温度条件：23~28℃，光照3h；28~30℃，光照3h；23~28℃，光照5h；15~23℃，黑暗13h，每天换气和适当补湿，使培养箱中相对湿度保持在85 %以上；（4）接种后发病情况调查:接种后10天观察每片叶病斑面积和菌丝层，根据离体叶片病情分级标准进行调查；病情分级标准：0级：无症状；1级：叶面出现褪绿及黄色病斑，病斑面积小于全叶面积的10%；3级：病斑上产生一薄层稀疏霉层，病斑面积占全叶的10 %～2 5 %；5级：有明显霉层，病斑面积占全叶的2 5 ～ 5 0 % ；7级：产生浓密霉层，病斑处发黑，病斑面积占全叶的5 0 %～75 % ；9级：病斑面积占全叶的75 %以上；以病情指数作为衡量病害严重程度的评价指标材料抗性划分标准：                                                                      。