[发明专利]一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法

摘要

本发明公开了一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，步骤如下：甲醛固定后组织的脱水处理、组织包埋、冷冻切片、染色与封片。本发明提供的方法，针对经甲醛固定后的南美白对虾性腺组织的冷冻切片技术，区别于新鲜组织的冷冻切片技术。相对于传统的石蜡切片方法，具有更高的切片效率，节约了时间。相比于一般的冷冻切片方法，具有更好的切片效果，有利于染色观察。

主权项

1.一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)甲醛固定后组织的脱水处理：取南美白对虾卵巢组织，固定于10％甲醛溶液中备用，再用手术刀片切取长度为0.5‑1.0cm的卵巢组织，浸泡在20％蔗糖溶液与OTC冷冻包埋剂体积为1:1的液体，浸泡时间至少16个小时；(2)组织包埋：将步骤(1)中浸泡好的卵巢组织取出，放入盛放OTC冷冻包埋剂的圆柱形软管模型中，用镊子夹取模型在液氮中速冻15‑20s，然后放进冷却好的冷冻切片机中，去除模型后得到样品，将样品用OTC冷冻包埋剂固定在预冷过的样品托上，放在速冻架上等待包埋剂完全冷冻；(3)冷冻切片：调节冷冻切片机冷冻箱温度为‑18℃，样品头温度为‑15℃，将样品托插入样品头，调整好样品与刀片的位置，先用修块模式进行修块使包埋的卵巢组织露出，后调至切片模式，将切片厚度调为5μm，进行切片；(4)切片固定：将步骤(3)切好的薄片用镊子或样品针捻于载玻片上，用甲醇固定(将载玻片在甲醇中浸泡5‑10s)，晾干后放进染色架中；(5)染色：将步骤(4)中得到的组织切片先用苏木素染液染色1.5min，然后用水冲洗5min；再在分化液分化30s；接着在水中浸泡15min或温水(50℃)浸泡5min；然后置于伊红染液1min，染色后用水冲洗；水中浸泡5min，脱水后使之透明，进行封片。