[发明专利]一种用于HPV分型检测的试剂盒与方法

摘要

本发明提供了一种用于HPV分型检测的试剂盒与方法。所述试剂盒包括四种HPV的上下游引物组；DNA guides、不同荧光基团标记的四种分子信标、以及DNA编辑酶PfAgo；本发明根据HPV的E6基因或者L1基因靶序列设计高度特异性的引物、单链DNA guides和不同荧光基团标记的分子信标，利用PCR可以进行初步信号放大，然后通过磷酸化处理的单链DNA guides介导PfAgo的酶切，最后用分子信标进行第二步信号放大，通过荧光光度计来测得荧光信号的强弱对HPV进行分型。该方法具有特异性强，灵敏度高，对原始材料要求低，操作简单、快速、准确等特点，并且可以同时实现多种亚型的HPV分型检测。

主权项

1.一种用于HPV分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括四种HPV的上下游引物组；DNA guides、不同荧光基团标记的四种分子信标、以及DNA编辑酶PfAgo；所述四种HPV的上下游引物组包括：HPV6的上、下游引物组：HPV6的上游引物如SEQ ID NO.1所示，HPV6的下游引物如SEQ ID NO.2所示；HPV11的上、下游引物组：HPV11的上游引物如SEQ ID NO.3所示，HPV11的下游引物如SEQ ID NO.4所示；HPV16的上、下游引物组：HPV16的上游引物如SEQ ID NO.5所示，HPV16的下游引物如SEQ ID NO.6所示；HPV18的上、下游引物组：HPV18的上游引物如SEQ ID NO.7所示，HPV18的下游引物如SEQ ID NO.8所示；所述DNA guides包括：针对HPV6的3条DNA guide包括如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示的序列；针对HPV11的3条DNA guide包括如SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14所示的序列；针对HPV16的3条DNA guide包括如SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示的序列；针对HPV18的3条DNAguide包括如SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20所示的序列；所述不同荧光基团标记的四种分子信标包括：针对HPV6的分子信标如SEQ ID NO.21所示；针对HPV11的分子信标如SEQ ID NO.22所示；针对HPV16的分子信标如SEQ ID NO.23所示；针对HPV18的分子信标如SEQ ID NO.24所示；所述针对HPV6、HPV11、HPV16、HPV18的分子信标的5’端标记有荧光基团和3’端标记有猝灭基团。