[发明专利]人工转染获得稳定感染Cardinium的褐飞虱新品系的方法

摘要

本发明公开了人工转染获得稳定感染Cardinium的褐飞虱新品系的方法，属于农业生物技术范畴。该方法以白背飞虱和褐飞虱新产出的卵分别作为人工转染的供体和受体，利用显微注射仪吸取供体的细胞质成分，同时快速的注射到受体卵中。受体的卵经培养发育为初代母成虫(G0)，将它们与不感染的雄虫交配产生第一代(G1)，从中筛选感染的阳性雌虫继续与不感染的雄虫交配，产生第二代(G2)。多代检测均表现为阳性，从而成功获得稳定感染Cardinium的褐飞虱新品系。本发明所述方法可以快速建立感染Cardinium的褐飞虱新品系，它们的繁殖力和孵化率均显著降低，从而有利于控制褐飞虱的危害；本发明也为其他共生菌的转染提供了模型。

主权项

1.人工转染获得稳定感染Cardinium的褐飞虱新品系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)飞虱卵的收集：解剖感染Cardinium的白背飞虱与未感染Cardinium的褐飞虱产过卵的水稻苗，用镊子剖出新产的卵，以感染Cardinium白背飞虱的卵为人工转染的供体，未感染Cardinium的成熟褐飞虱的卵为人工转染的受体；(2)飞虱的卵的人工转染：用显微注射仪吸取供体卵的细胞质并快速地注射到受体胚胎的后部，注射后的卵转移到湿润的滤纸上，将存活的有眼点的卵转移到新滤纸上直到其孵化为若虫；将若虫饲养直到其羽化为成虫(G₀)；(3)注射后飞虱的筛选：将G₀雌成虫与不感染雄成虫配对后检测其感染状况，所产生的子代记为第一代(G₁)，并进行PCR检测，将Cardinium阳性G₁雌成虫与不感染雄虫交配，子代即为Cardinium稳定感染的第二代(G₂)，即获得稳定感染Cardinium的褐飞虱新品系。