[发明专利]一口血秋海棠的组培快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一口血秋海棠的组培快速繁殖方法，依次进行以下步骤：选择一口血秋海棠野生植株的叶片、叶柄作为外植体；将外植体消毒后作为培养材料进行愈伤组织的诱导和不定芽的分化；再进行不定芽的伸长生长、生根培养、移栽。本发明成功实现了一口血秋海棠的组培快繁，可以快速培育出大量幼苗，为该极小种群的保护提供一种切实可行的保护方法。

主权项

1.一口血秋海棠的组培快速繁殖方法，其特征在于依次进行以下步骤：1)、取材：选择一口血秋海棠野生植株的叶片、叶柄作为外植体；2)、外植体消毒：3)、外植体的愈伤组织的诱导和不定芽的分化：以消毒后的外植体作为培养材料；愈伤组织诱导培养基为以下任一：愈伤组织诱导培养基Ⅰ：MS+BA 1.5～2.0mg/l+IBA 0.1～0.15mg/l+蔗糖30g/1+琼脂6.9～7.0g/l+PVP 0.8g/l,pH 5.8～6.0；愈伤组织诱导培养基Ⅱ：MS+TDZ 0.05～0.1mg/l+NAA 0～0.1mg/l+蔗糖30g/1+琼脂6.9～7.0g/l+PVP 0.8g/l,pH 5.8‑6.0；愈伤组织的诱导和不定芽的分化的培养条件为：先黑暗培养1周；然后转入光照强度为30～35μmol.m^‑2.s^‑1的光/暗(12h/12h)交替培养1～2周；然后再转入光照强度为35～40μmol.m^‑2.s^‑1的光/暗(12h/12h)交替培养，当培养材料的愈伤组织分化形成由数量≥5个不定芽组成的丛生芽时，停止培养；4)、不定芽的伸长生长将步骤3)所得的丛生芽分成带有2～3个不定芽的小植株，然后转移到伸长培养基上进行伸长生长；所述伸长培养基为：MS+BA 0.2～0.5mg/l+NAA 0～0.1mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6.9～7.0g/l+PVP 0.8g/l，pH 5.8～6.0；所述伸长生长培养条件为：先于黑暗培养1周；然后转入光照强度为30～35μmol.m^‑2.s^‑1的光/暗(12h/12h)交替培养1周，然后再转入光照强度为35～40μmol.m^‑2.s^‑1的光/暗(12h/12h)交替培养2～3周，停止培养；5)、生根培养：将步骤4)培养所得的幼苗转入生根培养基中进行生根培养；生根培养的条件为：先在黑暗条件下培养1周；然后转入光照强度为30～35μmol.m^‑2.s^‑1的光/暗(12h/12h)交替培养1周，然后再转入光照强度35～40μmol.m^‑2.s^‑1的光/暗(12h/12h)交替培养2～3周，结束生根培养；所述生根培养棊为以下任意一种：1/2MS+NAA 0.2～0.4mg/l+蔗糖20g/l+琼脂7.3g/l+PVP 0.8g/l，pH 5.8～6.0；1/2MS+IBA 0.4～0.6mg/l+蔗糖20g,/l+琼脂7.3g/l+PVP 0.8g/l,pH 5.8～6.0；6)、移栽：将步骤5)已生根的植株，移栽至基质上培养。