[发明专利]一种利用番茄叶片建立高效再生系统的方法

摘要

本发明公开了一种利用番茄叶片建立高效再生系统的方法，以番茄叶片为外植体，通过种子处理、无菌苗的培养、愈伤组织分化培养、芽诱导分化培养、壮苗培养、生根培养、驯化炼苗，成功建立起一套高效实用的番茄快繁体系，以实现番茄快速、高效地繁殖。本方法取材容易，操作简单，繁殖周期短，番茄成活率达90％以上。

主权项

1.一种利用番茄叶片建立高效再生系统的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，种子处理：番茄种子在75％酒精中浸泡1min，灭菌水清洗3次，饱和磷酸钠溶液浸泡20min，灭菌水清洗3次，1％次氯酸钠溶液浸泡10min，灭菌水清洗5～7次；步骤2，无菌苗的培养：处理后的种子接种到MS培养基，置于培养箱中，26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养，待子叶长出后，剪取大小为1cm²子叶；步骤3，愈伤组织分化培养：将剪取的子叶接于愈伤组织分化培养基MS+0.5～2mg/L IAA+1.5～2mg/L ZT+1～3mg/L AgNO₃，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养，两周更换一次培养基，直到愈伤组织形成；步骤4，芽诱导分化培养：待愈伤组织形成后，将愈伤组织切成0.5×0.5cm小块，转移到芽诱导分化培养基MS+1～2mg/L ZT+1～2mg/L IAA，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养，两周更换一次培养基；步骤5，壮苗培养：待每个愈伤组织上分化出5～10个芽后，将生长良好的丛芽分成单芽，接种于壮苗培养基MS+0.5～1mg/L IAA，培养瓶每瓶接入4～6个单芽，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养；步骤6，生根培养：当芽长到2～3cm时，切芽并将其转入生根培养基MS+0.5～1mg/L IAA+0.5～0.75mg/L ZT，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养；步骤7，驯化炼苗：番茄组培苗在生根培养基中植株高度达4～5cm时，打开培养瓶盖子，加入0.5～1cm的蒸馏水，培养箱中炼苗2d，然后将组培苗取出，洗去根部培养基残渣，将幼苗移栽至营养基质，头三天覆盖塑料薄膜保湿，在室温下炼苗一周，期间补充MS营养液一次，一周后可将幼苗移栽到大田。