[发明专利]具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株、筛选方法、重组工程菌表达重组蛋白的制备方法有效
| 申请号： | 201910598485.1 | 申请日： | 2019-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN110396533B | 公开（公告）日： | 2023-05-26 |
| 发明（设计）人： | 刘霆 | 申请（专利权）人： | 成都英普博集生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12Q1/10;C12N13/00;C12P21/02;C07K19/00;C07K14/635;C07K14/605;C12R1/19 |
| 代理公司： | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人： | 曾凯 |
| 地址： | 610000 四川省成都市高*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株、筛选方法、重组工程菌表达重组蛋白的制备方法，属于大肠杆菌菌株技术领域，筛选方法包括以下步骤：诱变过程、加压培养过程以及传代稳定性检测过程，诱变过程、加压培养过程以及传代稳定性检测过程形成一次完整的筛选过程，重复N次筛选过程得到纯化的具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株；其中：N为自然数，第N次筛选过程中被诱变的菌株为第N+1具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株且加压培养的噬菌体为第N+1噬菌体；该具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株N+1种噬菌体均具有抗性，不受这N+1种噬菌体的影响，因此不需要定期对设备、环境消毒或更换不同的大肠杆菌宿主，节约生产成本和提高了生产效率。 | ||
| 搜索关键词： | 具有 噬菌体 抗性 大肠杆菌 菌株 筛选 方法 重组 工程 表达 蛋白 制备 | ||
【主权项】：
1.一种具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将对所有噬菌体均无抗性的大肠杆菌经过化学诱变或物理诱变，得到诱变大肠杆菌菌落；S2：将诱变大肠杆菌菌落与第一噬菌体混合加压培养，筛选出形态完整的诱变大肠杆菌菌株即为具有第一噬菌体抗性的大肠杆菌菌株；S3：步骤S1和步骤S2形成一个诱变筛选过程，重复诱变筛选过程1‑2次，得到第一具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株；S4：传代稳定性检测，具体为：步骤S3得到的具有第一噬菌体抗性的纯化大肠杆菌连续传代10代，每传代1次，用双层平板法测定其噬菌体抗性，得到纯化的第一具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株；S5：步骤S1、S2、S3以及S4构成一次完整的筛选过程，重复N次筛选过程得到纯化的具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株；其中：N为自然数，第N次筛选过程中被诱变的菌株为第N+1具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株且加压培养的噬菌体为第N+1噬菌体。
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