[发明专利]一种同位素稀释质谱法测定血清miR-224含量的方法有效
| 申请号： | 201910599052.8 | 申请日： | 2019-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN110220994B | 公开（公告）日： | 2022-02-18 |
| 发明（设计）人： | 王峰;季伙燕;吴安琪;李袆;鞠少卿;王建新;沈蕾 | 申请（专利权）人： | 南通大学附属医院 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08 |
| 代理公司： | 南通毅帆知识产权代理事务所(普通合伙) 32386 | 代理人： | 任毅 |
| 地址： | 226001 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同位素稀释质谱法测定血清miR‑224含量的方法，包括如下步骤：(1)合成miR‑224核酸单链并配成溶液，建立标准曲线；(2)合成核酸肽探针并配成溶液，用以捕获miR‑224；(3)合成同位素标记的多肽并配成溶液作为内标；(4)在血清样本中提取miRNA；(5)将提取出的miRNA生物素化；(6)将上述miRNA与链霉素琼脂糖球反应，形成miRNA‑生物素‑链霉亲和素琼脂糖球复合物；(7)加入核酸肽探针捕获miR‑224‑生物素‑链霉亲和素琼脂糖球复合物；(8)将上述复合物清洗干净后加入胰蛋白酶酶解，然后将酶解产物固相萃取，将萃取出的多肽吹干并复溶；(9)将复溶后的多肽和同位素标记的多肽样品进行质谱分析；(10)计算血清样本中miR‑224含量。本发明准确度高，结果可靠。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 同位素 稀释 质谱法 测定 血清 mir 224 含量 方法 | ||
【主权项】：
1.一种同位素稀释质谱法测定miR‑224含量的方法，包括如下步骤：(1)将合成的miR‑224核酸单链配成溶液，用于建立标准曲线；(2)合成核酸肽探针配成溶液，用以捕获miR‑224；(3)将合成的同位素标记多肽并配成溶液作为内标；(4)在血清样本中提取miRNA；(5)将提取出来的miRNA进行生物素化；(6)将上述生物素化的miRNA‑224与链霉素琼脂糖球反应，形成miRNA‑224‑生物素‑链霉亲和素琼脂糖球复合物；(7)加入核酸肽探针捕获miR‑224‑生物素‑链霉亲和素琼脂糖球复合物；(8)将核酸肽探针‑miR‑224‑生物素‑链霉亲和素琼脂糖球复合物清洗干净后加入胰蛋白酶进行酶解，然后将酶解产物进行固相萃取，将萃取出的多肽吹干并复溶；(9)将复溶后的多肽和同位素标记的多肽样品进行质谱分析；(10)计算血清样品中miR‑224含量。
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