[发明专利]一种基于二代测序技术的游离线粒体DNA突变检测技术在审
| 申请号： | 201910616177.7 | 申请日： | 2019-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN110305945A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 邢金良;刘洋;尹纯 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;G16B30/10 |
| 代理公司： | 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 11616 | 代理人： | 梁永昌 |
| 地址： | 710032 陕西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于二代测序技术的游离线粒体DNA突变检测技术，主要包括以下步骤：1)制备cfDNA单链测序文库，2)mtDNA捕获，3)数据分析。本发明与现有技术相比的优点在于：针对游离mtDNA片段化程度高，突变频率低的特征，在NGS中富集游离mtDNA序列信息，解决其低频突变检测假阳性问题，克服NUMT对于突变检测的干扰，实现游离线粒体DNA突变的精准检测。 | ||
| 搜索关键词： | 游离 线粒体DNA突变 二代测序技术 检测技术 突变检测 测序文库 数据分析 突变频率 假阳性 片段化 单链 富集 制备 捕获 检测 | ||
【主权项】：
1.一种基于二代测序技术的游离线粒体DNA突变检测技术，其特征在于：主要包括以下步骤：1)制备cfDNA单链测序文库：将提取的cfDNA片段末端去磷酸化并变性为单链；利用DNA连接酶在cfDNA片段的两侧末端连接接头，接头含有12bp的随机碱基序列；通过引物延伸，将单链DNA文库变成双链文库。2)mtDNA捕获：利用三对引物扩增mtDNA片段，并将PCR产物等摩尔混合后打断到150bp，制备生物素标记的杂交捕获探针；按照探针与模板800：1摩尔比的含量进行捕获并测序。3)数据分析：对测序数据进行质控，利用BWA‑mem软件将质控后的clean data比对至人类参考基因组hg19上，最后提取比对到线粒体参考基因组rCRS的数据进行突变位点分析。
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