[发明专利]一种利用酿酒酵母直接分泌表达成熟双链甘精胰岛素的方法有效
| 申请号： | 201910616814.0 | 申请日： | 2019-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN110331159B | 公开（公告）日： | 2021-08-03 |
| 发明（设计）人： | 阿迪亚;陆勇军 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/62;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 孙凤侠 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用酿酒酵母直接分泌表达成熟双链甘精胰岛素的方法。该方法首先构建过表达Kex2的底盘细胞，然后将串联信号肽及密码子优化的甘精胰岛素DNA转入过表达Kex2的底盘细胞中，形成酿酒酵母共表达体系，进行蛋白表达纯化，即可得到甘精胰岛素。该方法极大降低了甘精胰岛素生产工艺难度，使传统工艺中下游多步繁琐复杂的加工流程得以简化，让酵母细胞在胞内直接完成修饰工作。同时，此法降低了纯化复杂性，可通过一步成本相对低的离子交换纯化直接从培养基中提取成熟的胰岛素蛋白。另外，由于避免使用胰蛋白酶等成分，避免了原有工艺中接近50％的副产物，提升了培养基中碳源等营养物质的发酵使用效率，具有很好的推广应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 酿酒 酵母 直接 分泌 表达 成熟 双链甘精 胰岛素 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用酿酒酵母直接分泌表达成熟双链甘精胰岛素的方法，其特征在于，在酿酒酵母细胞中，共表达优化的Kex2蛋白酶及含有分泌信号肽的甘精胰岛素原，使得甘精胰岛素原在酿酒酵母细胞分泌途径中被共表达的Kex2蛋白酶修饰切割，由甘精胰岛素原单链结构转变为成熟双链结构的甘精胰岛素，并借助分泌信号肽分泌到酿酒酵母细胞外，直接获得序列结构正确、无需体外加工的甘精胰岛素。
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