[发明专利]一种对虾细胞连续培养方法有效
| 申请号： | 201910622127.X | 申请日： | 2019-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN110283777B | 公开（公告）日： | 2020-12-29 |
| 发明（设计）人： | 郭华荣;宋欣;周阳 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 曾庆国 |
| 地址： | 266003 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明通过建立有效的对虾细胞3D培养与传代培养方法，从而提供了一种对虾细胞连续培养技术，可将其应用于对虾永生性细胞系的建立。本发明优化了基质胶的添加比例，从而提供了一种用于对虾细胞3D培养的基质胶制备方法；本发明还优化了对虾细胞完全培养基的配方，并选其作为对虾血淋巴细胞的抗凝剂与稀释剂，选用了基质胶表面附着生长的3D培养方式，从而提供了一种对虾外周血淋巴细胞的分离与3D培养技术，对虾血淋巴细胞以圆形单个细胞和细胞团/球的方式附着生长于基质胶表面，其存活和生长能力均优于2D培养效果；本发明还提供了一种3D培养对虾细胞的传代方法，传代后的对虾血淋巴细胞可以很好地附着于基质胶表面生长，传代后的存活率可高达90％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 对虾 细胞 连续培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种对虾细胞的3D培养方法，其特征在于，所述的培养方法是将对虾细胞悬液加入到已铺有基质胶的培养孔中，再补加对虾细胞完全培养基，再放置于CO2培养箱中进行培养，培养期间更换对虾细胞完全培养基；其中已铺有基质胶的培养孔，是将4℃预冷的基质胶以55‑80μL/cm2的比例加入到培养孔中；基质胶摊平后凝固制成的。
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