[发明专利]一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法在审
| 申请号： | 201910624055.2 | 申请日： | 2019-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN110257507A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 裘敏燕 | 申请（专利权）人： | 上海联吉医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 11616 | 代理人： | 魏蓓 |
| 地址： | 200000 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，利用生物信息学知识和相关生物信息学软件，对公开数据库中所能检索到的多个SNP位点(rs1051266、rs1544410、rs1801131、rs1801133、rs2234693、rs9340799、rs731236、rs7975232、rs1801394)序列信息进行同源性分析、周边SNP分析、频度分析、碱基含量分析及SNP周边序列分析后，设计特异的多重PCR引物系统及多重LDR探针系统并进行优化。本发明利用多重PCR‑LDR技术结合遗传分析仪的毛细管电泳技术进行片段长度分析实现SNP的检测分型，其优势在于通量大，特异性及灵敏度高，结果稳定，重复性好，检测速度快的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 联合检测 叶酸代谢 钙代谢 高血压 毛细管电泳技术 生物信息学软件 多重PCR引物 生物信息学 同源性分析 含量分析 技术结合 频度分析 探针系统 序列分析 序列信息 遗传分析 多重LDR 多重PCR 灵敏度 检测 分型 碱基 通量 检索 数据库 优化 分析 | ||
【主权项】：
1.一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于，包括以下步骤：Step.1样本基因组DNA的获取：用Qiagen DNA抽提试剂盒提取全血样本的基因组DNA；Step.2试剂保存：将收到的试剂盒放置于‑20℃的环境中保存，避免反复冻融；Step.3 PCR扩增：取PCR Mix 5.5ul，PCR引物2ul，Taq酶1.2ul，基因组DNA 2ul，补水至15ul；PC扩增条件：预变性，95℃，10min；94℃30s，56℃90s，72℃1min，循环40次；终延伸，72℃，10min；PCR引物包括VDR，ESR1，MTHFR，MTRR，SLC19A1基因序列，引物组具有如SEQ ID No：1‑14所示的核苷酸序列；Step.4 LDR连接：取Ligase Mix 0.5ul，探针0.5ul，连接酶1ul，PCR产物2ul，补水至5ul；预变性94℃，1min；94℃15s，50℃25s，循环40次；探针组具有如SEQ ID No：15‑41所示的核苷酸序列；Step.5毛细管电泳检测：取HIDI8.9ul，分子量内标0.1ul和连接产物2ul混合，95℃变性10min，冰浴冷却后上遗传分析仪3130XL，送样电压3KV，上样时间15sec；Step.6结果分析：使用GeneMapper ID V3.2软件对毛细管电泳结果进行分析，统计9个SNP位点的分型结果。
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