[发明专利]一种自转录序列的检测方法与应用和鉴定方法及其应用在审
| 申请号： | 201910628165.6 | 申请日： | 2019-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN110358818A | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 侯春晖;何娜;牛龙见;姜大新 | 申请（专利权）人： | 南方科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谢岳鹏 |
| 地址： | 518055 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种能够减少信息丢失、提高可靠性的自转录DNA序列的检测方法与应用和真核调控元件的鉴定方法及其应用。该检测方法包括以下步骤：构建报告载体，报告载体包括依次设置的启动子、ORF序列和插入的DNA片段；将报告载体转录为mRNA；使用反转录引物对mRNA进行反转录以获得cDNA；反转录引物包括：5′‑Z‑Tm‑Xn‑3′。本发明采用新的反转录引物对转录过程中得到的mRNA进行反转录，与现有技术相比，其对于将polyA序列加到插入片段自带pA位点的mRNA也能够实现良好的转录，确保在整个检测过程中插入片段信息的完整传递，避免信息的大量丢失，从而提高检测结果的可靠性，有效克服漏检现象的发生。 | ||
| 搜索关键词： | 转录 反转录引物 报告载体 检测 插入片段 反转录 应用 调控元件 检测结果 信息丢失 依次设置 转录序列 启动子 构建 漏检 位点 真核 自带 传递 | ||
【主权项】：
1.一种自转录序列的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：构建报告载体，所述报告载体包括依次设置的启动子、ORF序列和插入的DNA片段；将所述报告载体转录为mRNA，并进行加尾；使用反转录引物对所述mRNA进行反转录以获得cDNA；所述反转录引物包括：5′‑Z‑Tm‑Xn‑3′；其中，Z为测序引物序列，X选自碱基A、T、C、G中的任一种，16≤m≤24，4≤n≤8，m、n为整数。
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