[发明专利]一种填充制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种填充制剂及其制备方法，制备方法包括以下步骤：取外周血，离心得富血小板血浆，将其冻存，然后取出冻融，继续离心去除底部的膜碎片，得富血小板因子血浆，备用；取自体皮下脂肪，制得脂肪颗粒，取脂肪颗粒，向其中加入DMSO冷冻液进行冻存，然后复苏，向其中加入无菌生理盐水，得脂肪颗粒混悬液，最后向脂肪颗粒混悬液中加入胰岛素，摇匀备用；将脂肪颗粒离心，弃去上层油脂，得脂肪细胞，将脂肪细胞扩增培养至P4代，得脂肪干细胞重悬液，备用；将富血小板因子血浆、脂肪颗粒混悬液和脂肪干细胞重悬液按照一定体积比混匀，制得。该填充制剂可有效解决现有的填充材料存在的成活率低、移植后维持时间短以及填充效果差的问题。

主权项

1.一种填充制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采取外周血，用800～2000g/min的离心力离心6～12min，吸取中间部分，得富血小板血浆，将富血小板血浆置于‑40～‑80℃条件下冻存3～8h后取出冻融，然后将富血小板血浆于2000～4000rpm/min的离心力下离心6～10min，去除底部固体碎片，得富血小板因子血浆，备用；(2)吸取自体皮下脂肪，静置，弃去上层油脂后用无菌生理盐水洗涤2～3次，得脂肪颗粒，取一半脂肪颗粒，向其中加入1‑4倍脂肪颗粒体积的DMSO冷冻液，将脂肪颗粒进行梯度降温冻存，然后复苏脂肪颗粒并洗去脂肪颗粒内的DMSO冷冻液，再向其中加入无菌生理盐水，摇匀得脂肪颗粒混悬液，最后向脂肪颗粒混悬液中加入胰岛素，控制脂肪颗粒混悬液中胰岛素浓度为100～400mU/L，摇匀备用；(3)取步骤(2)中剩余的脂肪颗粒，在2000～4000rpm/min的离心力下离心10‑20min，弃去上层油脂，得脂肪细胞，然后按照2～3mL/瓶的比例将脂肪细胞接种到培养瓶中培养，每3～5天进行换液处理，长至50～70％融合度时用胰蛋白酶进行消化得原代脂肪细胞，将原代脂肪细胞按照5000‑8000个/cm²的比例接种到新的培养瓶中进行传代培养，对传代所得细胞进行消化和重悬，得脂肪干细胞重悬液；(4)取步骤(1)中的富血小板因子血浆、步骤(2)中的脂肪颗粒混悬液和步骤(3)中的脂肪干细胞重悬液按体积比为1～2:3～7:3～7混匀，制得。