[发明专利]EFTUD2启动子的转录活性的鉴定方法有效
| 申请号： | 201910651442.5 | 申请日： | 2019-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN110343719B | 公开（公告）日： | 2021-07-06 |
| 发明（设计）人： | 朱传龙;李毓雯;徐瑞瑞;宁琴;罗小平;李军;胡平平 | 申请（专利权）人： | 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12Q1/686;C12Q1/66 |
| 代理公司： | 南京科知维创知识产权代理有限责任公司 32270 | 代理人： | 杜依民 |
| 地址： | 210029 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种EFTUD2启动子的转录活性的鉴定方法，包括以下步骤：（1）构建EFTUD2启动子报告基因重组载体；（2）瞬时转染以及（3）双荧光素酶报告基因活性检测。本发明EFTUD2启动子的转录活性的鉴定方法为阐明EFTUD2基因的表达调控机制奠定了坚实的基础，也有助于进一步研究EFTUD2表达水平与固有免疫的关系以及差异性剪接的具体机制。 | ||
| 搜索关键词： | eftud2 启动子 转录 活性 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种EFTUD2启动子的转录活性的鉴定方法，其特征在于，该鉴定方法包括以下步骤：(1)构建EFTUD2启动子报告基因重组载体A1.引物的设计与合成：根据生物信息学分析得到的EFTUD2pro‑2.0kb启动子序列，设计覆盖目的基因全长的上下游引物，并根据预测的EFTUD2pro‑0.5kb、EFTUD2pro‑1.0kb、EFTUD2pro‑1.5kb启动子序列分别设计三对扩增引物，其中目的基因上下游引物分别加有双荧光素酶报告基因载体psiCHECK‑2上BglII和NheI限制性酶切位点两侧同源序列；B1.全基因合成与PCR扩增获取目的启动子序列：采用多重PCR全基因合成目的启动子序列EFTUD2 pro‑2.0kb，并以EFTUD2pro‑2.0kb序列为模板，PCR扩增目的启动子序列EFTUD2 pro‑0.5kb，EFTUD2 pro‑1.0kb，EFTUD2 pro‑1.5kb；C1.载体构建：通过BglII和NheI双酶切，将扩增回收好的目的启动子序列重组克隆到双荧光素酶报告基因载体psiCHECK‑2中，构建含EFTUD2启动子序列和双荧光素酶报告基因的EFTUD2启动子报告基因重组载体；(2)瞬时转染：将构建好的各EFTUD2启动子报告基因重组载体分别转染HepG2细胞；以及(3)双荧光素酶报告基因活性检测采用双荧光素酶报告基因检测系统试剂盒对收集的转染后48h的细胞样品进行荧光素酶报告基因活性检测。
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