[发明专利]一种食管癌细胞系中功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法及其应用在审
| 申请号： | 201910662025.0 | 申请日： | 2019-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN110295147A | 公开（公告）日： | 2019-10-01 |
| 发明（设计）人： | 李秀敏;张黎琛;周孝峰;侯静晗;王素杰;张爱佳;庞丹;卢奎;吕本洁;闫子怡;高灿 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/90;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 453003 *** | 国省代码： | 河南;41 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种食管癌细胞系中功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法及其应用。本发明通过分别转染目的基因sgRNA与CRISPR/Cas9载体同源重组后的质粒和CRISPR/Cas9的空载，然后利用流式细胞仪分选细胞，接种至六孔板中。余下的细胞裂解获取DNA，PCR后作琼脂糖凝胶鉴定验证。分选的细胞在细胞培养箱中培养2周后，终止培养，以4％多聚甲醛固定后，再经结晶紫染色。此时可肉眼判断每组细胞的克隆形成数目，克隆形成率可准确反映细胞的增殖能力和群体依赖性。根据克隆形成结果即可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型，本发明具有高效率、高精确和高通量等优势。 | ||
| 搜索关键词： | 功能基因 表型 敲除 细胞 增殖 食管癌细胞系 快速鉴定 克隆 分选 分子生物学技术 多聚甲醛固定 食管癌 结晶紫染色 流式细胞仪 琼脂糖凝胶 细胞培养箱 快速判断 目的基因 肉眼判断 同源重组 细胞裂解 增殖能力 高通量 高效率 六孔板 空载 质粒 转染 接种 应用 验证 群体 | ||
【主权项】：
1.一种食管癌细胞系中功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将食管癌细胞功能基因PARK2基因敲除；步骤2：细胞分选，将功能基因敲除的细胞与空载对照组细胞分别接种至孔板培养；步骤3：将孔板培养的细胞固定后，经结晶紫染色，目测两组细胞的克隆形成率，判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于新乡医学院，未经新乡医学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910662025.0/，转载请声明来源钻瓜专利网。
