[发明专利]重组argF蛋白纳米微粒的制备及应用

摘要

本发明涉及一种重组argF蛋白纳米微粒的制备方法、制备获得的重组argF蛋白纳米微粒及其制备结核杆菌疫苗的应用，其中所述制备方法为：将冻干的重组蛋白argF粉末溶解于PBS溶液中作为内水相；称取适量的PLGA，溶于一定体积的乙酸乙酯中，作为油相备用；配制1％PVA水溶液作为外水相，0.5％PVA水溶液作为扩散相；将所述内水相缓慢滴加到所述油相中，冰浴下超声一定时间形成初乳；随后将形成的所述初乳逐滴加入到一定体积的外水相溶液中，冰浴下超声一定时间形成复乳；将形成的复乳体系滴加到所述扩散相中，放置于磁力搅拌器上，使有机溶剂充分扩散到所述扩散相中，从而固化聚合物乳滴；向形成的所述聚合物乳滴中加入灭菌蒸馏水，洗涤得到重组argF蛋白纳米微粒乳液。采用本发明所述方法制备的重组argF蛋白纳米微粒获得的疫苗与传统BCG免疫对照相比，使用argF纳米微粒疫苗可以明显提高黏膜免疫IgA水平、减少组织载菌量，促进BCG免疫效果。

主权项

1.一种重组argF蛋白纳米微粒的制备方法，其特征在于，具体包括如下操作步骤：(1)将冻干的重组蛋白argF粉末溶解于PBS溶液中作为内水相；(2)称取适量的PLGA，溶于一定体积的乙酸乙酯中，作为油相备用；(3)配制1％PVA水溶液作为外水相，0.5％PVA水溶液作为扩散相；(4)将所述内水相缓慢滴加到所述油相中，冰浴下60W功率超声一定时间形成初乳；(5)随后将步骤(4)中形成的所述初乳逐滴加入到一定体积的外水相溶液中，冰浴下100W功率超声一定时间形成复乳；(6)将所述步骤(5)形成的复乳体系滴加到所述扩散相中，放置于磁力搅拌器上，700rpm室温下持续搅拌4h，使有机溶剂充分扩散到所述扩散相中，从而固化聚合物乳滴；(7)向步骤(6)形成的所述聚合物乳滴中加入6‑10倍体积的灭菌蒸馏水，5000rpm，4℃离心3min，洗涤两次，即可得到重组argF蛋白纳米微粒乳液。