[发明专利]一种多基因重组干酪乳酸杆菌、制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种多基因重组干酪乳酸杆菌、制备方法及应用，通过T‑A克隆将目的基因分别连入到pMD18‑T，转化至DH5α感受态细胞得到pMD18‑T‑S1、pMD18‑T‑GtxA‑N和pMD18‑T‑flfA，分别以pMD18‑T‑S1、pMD18‑T‑GtxA‑N和pMD18‑T‑flfA为模板进行扩增，得到三条目的片段，将三条目的片段连接为一条片段，PCR扩增pMG36e使其变为线性化载体，通过无缝克隆技术将该片段和线性化载体连接，并将连接产物转化至XL1‑Bule感受态细胞中得到重组质粒，将其电转化入干酪乳酸杆菌中得到重组干酪乳酸杆菌。

主权项

1.一种多基因重组干酪乳酸杆菌，其特征在于，所述多基因重组干酪乳酸杆菌由重组质粒pMG36e‑S1‑GtxA‑flfA电转化至干酪乳酸感受态细胞杆菌获得；所述重组质粒pMG36e‑S1‑GtxA‑flfA是将融合基因S1‑GtxA‑flfA连入线型质粒pMG36e的kPnI位点和SalI位点之间得到的，所述融合基因S1‑GtxA‑flfA的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示。