[发明专利]一种利用流式细胞仪检测单细胞RNA表达的单细胞基因表达分析方法在审
| 申请号： | 201910670421.8 | 申请日： | 2019-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN110373451A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 柯荣秦;林辰;赵彦松;吴鹏程;陈小媛 | 申请（专利权）人： | 华侨大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6834 | 分类号： | C12Q1/6834 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭;姜谧 |
| 地址： | 362000 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用流式细胞仪检测单细胞RNA表达的单细胞基因表达分析方法，使锁式探针或者双连接探针进入悬浮的细胞中识别并杂交到其目标RNA上的靶序列，通过连接酶将探针连接成环后经过滚环扩增得到滚环扩增产物；未杂交连接的探针无法成环，因此没有扩增产物；滚环扩增产物与荧光标记的检测探针杂交，多余的检测探针通过离心洗涤除去；制备好的样品可以通过流式细胞仪进行荧光信号测定，根据测定荧光信号强度判定目标RNA在单细胞中的表达情况。本发明高度整合了核酸技术、滚环扩增技术和流式细胞术，实现对单细胞RNA表达在流式细胞仪上进行检测分析。 | ||
| 搜索关键词： | 流式细胞仪 扩增产物 基因表达分析 滚环扩增 检测探针 荧光信号 成环 滚环 杂交 流式细胞术 核酸技术 检测分析 离心洗涤 连接探针 强度判定 锁式探针 探针连接 荧光标记 杂交连接 靶序列 连接酶 检测 探针 整合 制备 悬浮 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种利用流式细胞仪检测单细胞RNA表达的单细胞基因表达分析方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)根据目标RNA上的靶序列设计锁式探针或双连接探针及其相应的滚环扩增引物和检测探针，该检测探针标记有可被流式细胞仪检测的基团；(2)将待测细胞经培养后制成单细胞悬液，在该单细胞悬液中加入固定剂，使待测细胞中的RNA分子得到固定；(3)使上述锁式探针或双连接探针进入步骤(2)所得的物料的待测细胞内，并与待测细胞内的上述目标RNA上的靶序列识别并杂交，通过DNA连接酶使得与靶序列识别并杂交的上述锁式探针或双连接探针连接成环后，在细胞内通过上述滚环扩增引物进行滚环扩增，得到滚环扩增产物；(4)在细胞内，将上述检测探针与上述滚环扩增产物杂交，多余的检测探针通过洗涤去除，获得待测样品；(5)将上述待测样品送入流式细胞仪进行信号测定，根据测定的信号强度判定目标RNA在待测细胞内的表达情况。
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