[发明专利]一种海洋蛭弧菌的长期保存方法有效
申请号: | 201910671684.0 | 申请日: | 2019-07-24 |
公开(公告)号: | CN110257304B | 公开(公告)日: | 2023-09-19 |
发明(设计)人: | 薛明;温崇庆;刘美华 | 申请(专利权)人: | 广东海洋大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/04 |
代理公司: | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人: | 陈炳萍 |
地址: | 524088 *** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明涉及菌种保存技术领域,公开了一种海洋蛭弧菌的长期保存方法,包括制备宿主菌海水悬液、制备海洋蛭弧菌海水悬液和菌种保存。本发明打破了低温长期保存蛭弧菌的传统理念,实现了对蛭弧菌常温条件下的长期保存,保存方法简单,保存效果好,节约长期保存的成本。 | ||
搜索关键词: | 一种 海洋 弧菌 长期 保存 方法 | ||
【主权项】:
1.一种海洋蛭弧菌的长期保存方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:制备宿主菌海水悬液制备SWYE液体培养基,将用于保存海洋蛭弧菌的宿主菌接种于SWYE液体培养基中,振荡培养至对数末期后对含有宿主菌的SWYE液体培养基进行离心,并用无菌海水漂洗两次后得到宿主菌培养菌,随后将宿主菌培养菌悬于无菌海水中制备宿主菌海水悬液,并调整宿主菌海水悬液中的菌液浓度,菌液浓度为106cfu/mL或107cfu/mL;S2:制备海洋蛭弧菌海水悬液制备菌液浓度为5×108cfu/mL的用于培养海洋蛭弧菌的宿主菌海水悬液,将海洋蛭弧菌接种于上述宿主菌海水悬液中,30℃振荡培养至宿主菌被裂解完全且含有大量攻击期海洋蛭弧菌时,取培养液于1000g条件下离心10min后取上清液,用0.45μm滤膜过滤两次后再于12000g条件下离心20min,弃掉上清液,用无菌海水漂洗离心后的沉淀物,随后再于12000g条件下离心20min,随后将海洋蛭弧菌培养菌悬于无菌海水中制备海洋蛭弧菌海水悬液,并调整海洋蛭弧菌海水悬液的菌液浓度,菌液浓度为108pfu/mL或3.33×107pfu/mL或107pfu/mL;S3:菌种保存将步骤S2中制备的海洋蛭弧菌海水悬液与步骤S1中制备的宿主菌海水悬液等体积混合在一起,向5mL无菌螺帽管内装入4mL上述混合液,并将装有混合液的无菌螺帽管置于15‑37℃条件下保存。
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