[发明专利]一种KRAS基因突变位点的检测引物、探针和试剂盒

摘要

本发明提供一种KRAS基因突变位点的检测引物、探针和试剂盒，目前KRAS基因的突变检测位点为KRAS基因2号外显子第12和第13位密码子上的7个热点突变点：G12S、G12R、G12C、G12D、G12A、G12V、G13D，这7种突变占到了所有突变的98.5％以上。市面上的KRAS基因突变位点检测试剂盒均采用分7管检测KRAS的7个热点突变点，检测过程繁琐，成本贵，且检测样本类型主要针对组织或血液样本，不能检测粪便这种抑制剂含量很多的样本。本发明将检测7个突变点时需要的7个反应管，减少为2个反应管，操作步骤简单，成本更低，耗时更少。并通过巧妙的引物设计进一步提高了检测的灵敏性和特异性，本发明能检出10ng的样本DNA中低至1％的突变，适宜临床实际应用和推广。

主权项

1.一种能够同时检测7种KRAS基因突变的引物和探针组合物，所述KRAS基因突变包括在2号外显子第12和第13位的如下密码子突变点中的任一种或多种：G12S、G12R、G12C、G12D、G12A、G12V、G13D；所述引物是将所述突变点设计在引物序列3'端的第一位，并在3'端的第二位、第三位和/或第四位增加一个或多个碱基的错配，使野生型的序列不能与设计的引物序列结合，而突变型的序列能高效的扩增；优选地，所述的密码子突变对应的碱基突变依次为34G>A、34G>C、34G>T、35G>A、35G>C、35G>T、38G>A。