[发明专利]一种大麦小孢子的取材方法

摘要

一种大麦小孢子的取材方法，包括：1)幼穗取材及预处理；2)收集、纯化小孢子。本发明在幼穗取材时，通过控制旗叶与倒二叶叶舌的间距为1.1‑2.0cm，缩小小孢子培养中的诱导分化差异，分离获得的小孢子经培养后诱导成胚率高，分化绿苗能力强，小孢子培养再生的效率提高了3倍，大大降低了小孢子培养中对人工及设备的要求，且能做到量化取材标准，可以提高取材的效率和标准的实用性。

主权项

1.一种大麦小孢子的取材方法，包括如下步骤：1)幼穗取材及预处理选取大麦幼穗，其旗叶到叶舌的间距为1.1‑2.0cm，保留幼穗上部两片叶子下的基部1.0‑1.5cm，除去叶片，置于2‑10℃环境中低温预处理10‑30天；2)收集、纯化小孢子对幼穗进行消毒，将花苞接种至试管中，添加10‑15ml提取液，旋切，过滤；滤液以400‑1000r·min^‑1速度离心3‑7min，重复1‑4次，收集小孢子；将收集到的小孢子用提取液于23‑28℃，黑暗中预处理1‑3天后，再用20‑22％麦芽糖纯化，将死活细胞分开，收集活的小孢子；其中，所述的提取液中含有甘露醇50‑70g·L^‑1，添加CaCl₂0.8‑1.5g·L^‑1、N‑吗啡乙烷磺酸0.8‑1.1g·L^‑1和秋水仙碱5‑25mg·L^‑1，pH5.6‑6.0。