[发明专利]一步法Gateway反应构建表达载体的方法及应用有效
| 申请号： | 201910677970.8 | 申请日： | 2019-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN110484548B | 公开（公告）日： | 2023-02-21 |
| 发明（设计）人： | 于德水;李成伟;廖立冰;朱鑫;李晓丽;杨璐;付贝贝;许艳霞;段克雷 | 申请（专利权）人： | 周口师范学院 |
| 主分类号： | C12N15/64 | 分类号： | C12N15/64;C12N15/82 |
| 代理公司： | 河南科技通律师事务所 41123 | 代理人： | 樊羿;张晓辉 |
| 地址： | 466001 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： |
本发明公开了一种一步法Gateway反应构建表达载体的方法及应用，旨在解决现有技术构建表达载体耗时、操作繁琐、成功率低，成本高昂的技术问题。该方法为：以L1‑F、L1‑R、L2‑F和L2‑R为引物扩增含有 |
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| 搜索关键词： | 一步法 gateway 反应 构建 表达 载体 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种一步法Gateway反应构建表达载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）以L1-F和L1-R为引物扩增含有attL1的DNA片段；以L2-F和L2-R为引物扩增含有attL2的DNA片段；所述引物L1-F、L1-R、L2-F和L2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示；/n（2）以特异引物扩增目的基因；所述特异引物的上下游序列包括目的基因的特异序列和接头序列；所述上游接头序列为所述引物L1-R的互补序列中任一连续22bp的序列；所述下游接头序列为所述引物L2-R的互补序列中任一连续22bp的序列；/n（3）将含有attL1的DNA片段、含有attL2的DNA片段和目的基因片段混合，利用所述引物L1-F和L2-F进行融合PCR，得含有attL重组位点的目的基因片段；/n（4）将所得含有attL重组位点的目的基因片段与目标载体进行LR反应，即得目的基因表达载体。/n
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