[发明专利]vp19转基因蓝藻及其在制备防治对虾白斑综合征病毒药物中的用途在审
| 申请号： | 201910682028.0 | 申请日： | 2019-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN110438054A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 贾睿;朱婵;徐杨;何培民;廖圣瑜 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 周一新 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了vp19转基因蓝藻及其在制备防治对虾白斑综合征病毒药物中的用途，通过vp19穿梭质粒转入蓝藻构建vp19转基因蓝藻，以对虾白斑综合症病毒的基因组DNA为模板，设计扩增引物进行PCR扩增，得到的vp19基因与pRL489质粒连接，构建vp19穿梭表达载体并转入大肠杆菌，将含有pR4‑pRL‑542质粒的大肠杆菌、含有pRL489‑vp19质粒的大肠杆菌和纯化后的野生型蓝藻培养后按比例混合，三亲接合转移得到蓝藻转化子，继续培养。所得的vp19转基因蓝藻作为活性成分用于制备防治对虾白斑综合征病毒药物，有效使用剂量为1～20μg/尾，效果显著且易于控制成本。 | ||
| 搜索关键词： | 转基因蓝藻 对虾白斑综合征病毒 大肠杆菌 质粒 制备 蓝藻 构建 防治 对虾白斑综合症病毒 转入 穿梭表达载体 设计扩增引物 按比例混合 基因组DNA 穿梭质粒 蓝藻培养 有效使用 接合 野生型 转化子 基因 | ||
【主权项】：
1.vp19转基因蓝藻，其特征在于：通过vp19穿梭质粒转入蓝藻得到，其构建方法包括以下步骤：(ⅰ)以对虾白斑综合症病毒的基因组DNA为模板，设计扩增引物对如SEQ ID.NO.1和SEQ ID.NO.2所示，用PCR法扩增获得vp19基因；(ⅱ)步骤(ⅰ)所得vp19基因和pRL489质粒连接，构建vp19穿梭表达载体并转入大肠杆菌，得到含有pRL489‑vp19质粒的大肠杆菌；(ⅲ)将含有pR4‑pRL‑542质粒的大肠杆菌、步骤(ⅱ)获得的含有pRL489‑vp19质粒的大肠杆菌和纯化后的野生型蓝藻培养到对数生长中期，并按照细胞数量比为5：5：1混合，通过三亲接合转移用带vp19基因的载体转化蓝藻，并筛选蓝藻转化子；(ⅳ)步骤(ⅲ)所得蓝藻转化子继续培养，得到vp19转基因蓝藻。
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