[发明专利]一种丙氨酸消旋酶的突变体酶蛋白及其制备方法有效

专利信息
申请号: 201910691113.3 申请日: 2019-07-29
公开(公告)号: CN110669751B 公开(公告)日: 2022-06-14
发明(设计)人: 鞠建松;韩卿卿;徐书景;任晓朴;窦金萍;郭博涵;何广正;赵宝华 申请(专利权)人: 河北师范大学
主分类号: C12N9/90 分类号: C12N9/90;C12N15/60;C12N15/70;C12P13/06;C12R1/19
代理公司: 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司 13100 代理人: 董金国
地址: 050024 河*** 国省代码: 河北;13
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摘要: 发明公开了一种丙氨酸消旋酶的突变体酶蛋白及其制备方法。根据同源序列二级结构比对结果,通过定点突变技术将腾冲嗜热厌氧菌中丙氨酸消旋酶的173、360两个位点分别突变,构建双点突变表达载体pET‑S173Q/Q360Y,通过原核表达、纯化获得酶蛋白。所获得的突变体蛋白对底物L‑Ala的表观二级速率常数kcat/Km为18.44 s‑1·mM‑1,平衡常数Keq(L/D)为3.95,是野生型蛋白的68.30和3.69倍,且突变体蛋白的半衰期也有一定程度的提升。由于突变体蛋白可以提高反应产物D‑Ala的转化效率,因此,本突变体可以作为生物合成D‑Ala的元器件,有较好的应用价值。
搜索关键词: 一种 丙氨酸 消旋酶 突变体 蛋白 及其 制备 方法
【主权项】:
1.一种丙氨酸消旋酶的突变体酶蛋白,其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,其中:/nSEQ ID No.1所示的丙氨酸消旋酶的氨基酸序列中第173位的丝氨酸(S)突变为谷氨酰胺(Q);/n(B)SEQ ID No.1所示的丙氨酸消旋酶的氨基酸序列中第360位的谷氨酰胺(Q)突变为酪氨酸(Y)。/n
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