[发明专利]一种基于酶辅助循环信号放大的电化学急性白血病基因Pax-5a检测方法

摘要

一种基于酶辅助循环信号放大的电化学急性白血病基因Pax‑5a检测方法，其基于发卡型DNA探针(HP)控制转录的终止和翻译的效率优势，目标基因Pax‑5a打开HP，启动HP的复制模板功能，在DNA聚合酶和限制性内切酶的协同作用下，一方面辅助DNA促使目标基因Pax‑5a循环打开HP；另一方面，也产生大量的G‑四链体序列。G‑四链体序列由于碱基互补作用被金电极表面上的巯基修饰的探针捕获，然后在氯化血红素和钾离子的存在下形成G‑四链体/氯化血红素复合物，可以催化还原双氧水而产生电化学信号，电流的变化与目标基因浓度在一定范围内存在线性相关关系。该方法基于发卡型DNA探针酶辅助循环信号放大机制及一键式电化学检测平台，可以实现对目标基因高灵敏和高选择性检测。

主权项

1.一种基于酶辅助循环信号放大的电化学急性白血病基因Pax‑5a检测方法，包括以下步骤：(1)用三(2‑羧基乙基)膦溶液处理巯基修饰的探针以减少二硫键的存在；将巯基修饰的探针转移到金电极上，使巯基修饰的探针与金电极表面结合，再淋洗金电极除去未结合的巯基修饰的探针，并用巯基乙醇溶液进行封闭，得到改性金电极；(2)将发夹探针和不同浓度Pax‑5a的标准溶液在反应管中混合，加入缓冲液体系，孵育一段时间；再加入引物、DNA聚合酶、三磷酸碱基脱氧核苷酸和限制性内切酶，孵育一段时间，然后通过加热使酶失活；(3)将步骤(2)中的混合溶液转移到步骤(1)中的改性金电极上，孵育一段时间，淋洗除去残留的DNA；再将氯化血红素溶液转移到改性金电极上，孵育一段时间；(4)采用三电极系统，以含有双氧水的HEPES缓冲液为电解液，以经过步骤(3)处理的改性金电极为工作电极，以饱和甘汞电极为参比电极，以Pt电极为对电极，采用差分伏安脉冲法检测电信号变化；(5)根据检测到的电信号变化值及其对应的Pax‑5a的标准溶液浓度，绘制标准曲线；(6)对于未知浓度的待测液，按照步骤(2)至(4)并用待测液代替Pax‑5a的标准溶液进行检测，根据检测到的电信号和标准曲线信号的对比，得出待测液中Pax‑5a的浓度。