[发明专利]基于运动发酵单胞菌內源CRISPR-Cas系统的基因组大片段高效删除方法及其应用有效
| 申请号： | 201910692120.5 | 申请日： | 2019-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN110408642B | 公开（公告）日： | 2021-11-05 |
| 发明（设计）人： | 彭文舫;杨世辉;郑艳丽;易犁;马立新 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/90;C12N9/22;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及基于运动发酵单胞菌內源CRISPR‑Cas系统的基因组大片段高效删除方法及其应用。其技术要点包括：构建含人工CRISPR表达单元的质粒；确定大片段编辑靶位点，针对编辑靶位点选取guideRNA序列，并设计引物；将guideRNA引物序列构建至含人工CRISPR表达单元的质粒上，构建载体；将供体DNA序列构建至载体上，获得编辑质粒；将编辑质粒转化至感受态细胞中进行编辑。本发明利用基于运动发酵单胞菌內源CRISPR‑Cas系统的高通量基因编辑平台，实现对该菌株基因组大片段删除的编辑目的，促进代谢工程、系统生物学及合成生物学的发展。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 运动 发酵 单胞菌內源 crispr cas 系统 基因组 片段 高效 删除 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.基于运动发酵单胞菌內源CRISPR‑Cas系统的基因组大片段高效删除方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：构建含人工CRISPR表达单元的质粒；步骤2：确定大片段编辑靶位点，针对编辑靶位点选取guideRNA序列，并设计引物；步骤3：将guideRNA引物序列构建至含人工CRISPR表达单元的质粒上，构建载体；步骤4：将供体DNA序列构建至载体上，获得编辑质粒；步骤5：将编辑质粒转化至感受态细胞中进行编辑。
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