[发明专利]一种用于银杏愈伤组织诱导的无菌叶源的建立方法

摘要

本发明公开了一种用于银杏愈伤组织诱导的无菌叶源的建立方法，属于植物组织培养技术领域。本发明以银杏幼嫩枝条或成熟胚为材料，在芽诱导培养基或胚诱导培养基上培养40天，得到小苗或胚苗，剪获小苗的无菌叶片并将其原茎段基部斜切，或剪去胚苗的根，继续继代培养40天，再次剪获小苗或胚苗的无菌叶片后，将已去叶的抽长无菌嫩梢，剪成2‑3cm带芽的茎段，再在继代培养基上继续培养40天，以后可按茎段芽诱导、叶片抽出、收获叶片、茎段继续培养，反复进行，即得用于银杏愈伤组织诱导的无菌叶源，具有产量大、效率高，不受季节限制，持续稳定，源源不断的优点，所得无菌叶片可直接用于愈伤组织的诱导，具有很强的推广应用价值。

主权项

1.一种用于银杏愈伤组织诱导的无菌叶源的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取银杏幼嫩枝条，去除叶片，或成熟银杏种子，剥去骨质中种皮，对其进行浸泡、清洗和消毒；2)将银杏幼嫩枝条剪成2‑5cm并带有1‑3芽的茎段，接种在芽诱导培养基上培养40天，得到小苗；从银杏种子的胚乳中取出成熟胚，接种在胚诱导培养基上培养40天，得到胚苗；3)剪下小苗的大叶片作为无菌叶，将其原茎段基部斜切，在继代培养基上继续培养40天；将胚苗的胚根剪除但不剪叶，在继代培养基上继续培养40天；4)再次剪下小苗的大叶片作为无菌叶，并将已去叶的抽长无菌嫩梢去除原茎段，剪成2‑3cm带芽的茎段，再在继代培养基上继续培养40天，再次得到小苗；剪下胚苗长出的大叶片，并将已去叶的抽长无菌嫩梢，剪成2‑3cm带芽的茎段，再在继代培养基上继续培养40天，得到小苗；5)对步骤4)中得到的小苗反复重复步骤3)和4)中小苗的操作，即得用于银杏愈伤组织诱导的无菌叶源。