[发明专利]提高光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体蛋白复性方法

摘要

本发明旨在提供一种光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂融合蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72包涵体蛋白复性及活性的方法。本发明采用在变性液中添加尿素，并使用盐酸胍稀释复性的方法对光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂融合蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72包涵体蛋白进行活化，在整个蛋白复性过程控制蛋白浓度在1‑10μg/mL，获得的重组蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72在pH=7~9，60℃对丝氨酸蛋白酶的抑制活性高达95%以上，能够有效获得具有活性的重组蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72，为后续进一步研究光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能奠定基础。

主权项

1.提高光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂融合蛋白TrxA‑ApSerpin‑FA72包涵体蛋白复性及活性的方法，其具体方法步骤如下：将重组质粒pET32a‑ApSerpin‑FA72转化至大肠杆菌株BL21(DE3)中，筛选阳性单克隆进行培养，37℃、220r/min过夜培养，次日按1:100接菌于LB培养基中（Amp⁺）培养4h，菌体OD值为0.6，加入不同终浓度IPTG，32℃，180r/min条件下诱导4h，8000×g离心10min收集沉淀，用磷酸缓冲液将菌体重悬后；（2）用制备的Tris‑HCl缓冲液洗涤沉淀，超声破碎2min将溶液中的沉淀充分溶解，8000×g离心10min，重复三次后用Tris‑HCl缓冲液将残留在菌体上的洗涤液洗净；（3）包涵体在变性液4℃下充分溶解1h，8000×g离心15min，在18h内将复性缓冲液用蠕动泵缓慢加入溶解液中，并用磁力搅拌器缓慢搅拌。