[发明专利]一种AEP环化酶在毕赤酵母中的表达方法及其应用有效
| 申请号： | 201910712032.7 | 申请日： | 2019-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN110387366B | 公开（公告）日： | 2021-06-08 |
| 发明（设计）人： | 彭文舫;胡晓韵;易犁;范贤;马立新 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N9/50 | 分类号： | C12N9/50;C12N15/81;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种AEP环化酶在毕赤酵母中的表达方法及其应用。本发明通过在在毕赤酵母中进行表达，通过基因串联的方法使AEP环化酶基因串联拷贝数最高达到了5拷贝，当基因拷贝数达到3时AEP环化酶表达量最高，达到0.89±0.03mg/mL。本发明采用一种新的方式验证AEP环化酶的环化能力，通过构建一种串联底物，选取能够较好的在SDS‑PAGE中观察到并且具备环化的可能性的蛋白为底物，并构建包含TEV蛋白酶的底物序列的串联底物，根据蛋白酶切割后底物大小的变化或者条带数量来鉴定是否环化，操作简单、方便，实用性强。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 aep 环化酶 酵母 中的 表达 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种AEP环化酶在毕赤酵母中的表达方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：构建pBDM‑AEP载体；S2：构建多拷贝pBDM‑AEP质粒；S3：将6*His标签构建至多拷贝pBDM‑AEP质粒，构建含有His标签的AEP表达载体；S4：pBDM‑AEP‑6*His摇瓶诱导表达。
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