[发明专利]一种可提高葡萄酒风味与品质的酶制剂的生产与应用方法

摘要

本发明涉及工业微生物技术领域，具体是一种可提高葡萄酒风味与品质的酶制剂的生产与应用方法，包括以下步骤：（1）酵母细胞培养和收集、（2）酵母细胞破碎、（3）盐析、（4）透析。本发明利用高产β‑葡萄糖苷酶的库德毕赤酵母F2‑24确定了合适的细胞破碎条件并利用盐析、透析法从中提取富集β－葡萄糖苷酶。将β－葡萄糖苷酶的酶制剂加入葡萄汁中伴随酿酒酵母发酵后，使得酒样风味和品质显著提升，提高了葡萄酒的整体质量，为提高我国果酒产业的商业竞争力提供了可行方案。

主权项

1.一种可提高葡萄酒风味与品质的酶制剂的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)酵母细胞培养和收集：在28℃，转速为120rmp条件下，将F2‑24酵母接种于装有100ml发酵培养基的500mL三角瓶中培养5d至胞外酶活达到最大值17.32U/L，将发酵液在4℃下离心，分别收集发酵液上清和细胞，存于‑20℃冰箱备用；(2)酵母细胞破碎：将5g细胞溶于20mL Na₂HPO₄‑柠檬酸缓冲液中，4℃下超声破碎，整个操作在冰上进行，4℃离心后收集上清，离心的速度为13000rpm，离心的时间为30min；(3)盐析：向置于冰上的发酵液上清和细胞破碎液上清中分别缓慢加入硫酸铵固体粉末，边搅拌边加入，至80％饱和度后，冰浴静置2h，4℃离心后收集沉淀，离心的速度为13000rpm，离心的时间为30min；(4)透析：用适量Na₂HPO₄‑柠檬酸缓冲液溶解沉淀物后，装入已处理好的透析袋内，袋内放入大小合适的转子，并将两端夹紧，将透析袋放入装有1LNa₂HPO₄‑柠檬酸缓冲液的大烧杯中进行磁力搅拌，每2h换一次缓冲液，持续24h，用奈氏试剂检测，待硫酸铵去除干净，收集透析袋内的液体，即为酶制剂。