[发明专利]一种处理重度污染的脐带组织的方法

摘要

本发明公开了一种处理重度污染的脐带组织的方法,通过前期有序的消毒清洗，能够将组织内部和外部的污染物清理彻底，通过培养组织，多次筛选获得无污染的组织，通过组织块贴壁培养法获得质量合格的间充质干细胞；另外，整个筛选过程不添加任何抗生素抑制污染物生长，更客观地获得无污染的合格的细胞，对间充质干细胞的后期使用和实验不产生任何负面的影响。

主权项

1.一种处理重度污染的脐带组织的方法,其特征在于：包括以下步骤：A、去除脐带表面肉眼可见的污染源：将脐带放入培养皿中，用生理盐水冲洗，除去脐带表面较大的血块和粘液，每清洗一次换一个培养皿，至清洗后的溶液透明无色为止；B、去除脐带内三根血管内的血液：用注射器吸取生理盐水，从血管一端插入，用止血钳夹紧，迅速推入生理盐水，冲洗血管内壁，每次冲洗量为50ml‑60ml，每根血管冲洗5次‑6次，若还有红色液体流出，则增加次数，至流出液体透明无色；C、去除血管内的凝血：用注射器吸取肝素钠溶液，从血管一端插入，用止血钳夹紧，缓慢推入，每次冲洗量为20ml‑30ml，每根血管冲洗5次‑6次，直至流出的液体透明无色；D、血管内部消毒：用注射器吸取5ml‑6ml 75％酒精迅速冲洗血管内部，冲洗完毕后立即用20ml‑30ml生理盐水冲洗血管，三根血管依次消毒；E、脐带整体消毒：将脐带浸没在75％酒精中1分钟‑2分钟，至脐带表面褶皱，用生理盐水冲洗三遍，剪去脐带两端各2厘米；F、分离华通氏胶：将脐带展开，用手术刀直接割取脐带中心处的华通氏胶，操作过程中避免与血管有任何接触；G、华通氏胶表层消化：将所获得的整块华通氏胶，按体积比1:1，加入浓度为0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃，150rpm恒温摇床震荡消化5分钟‑6分钟；H、华通氏胶表层清洗：I、剪碎华通氏胶并清洗：将清洗后的组织放入离心管中剪成2mm×2mm大小的组织，加入生理盐水震荡清洗，用100目筛网过滤，重复两次；J、华通氏胶的筛选；K、脐带间充质干细胞培养扩增及冻存：根据组织贴壁法培养细胞，根据各机构要求扩增冻存脐带间充质干细胞。