[发明专利]一种靶向巨噬细胞过表达基因小鼠模型的制备方法

摘要

一种靶向巨噬细胞过表达基因小鼠模型的制备方法，属于疾病靶向治疗领域，利用慢病毒感染骨髓细胞再结合骨髓移植的方法，能够快速高效实现小鼠巨噬细胞特异性基因过表达。相比于转基因小鼠构建等技术，时效性更高。

主权项

1.一种靶向巨噬细胞过表达基因小鼠模型的制备方法，其特征在于步骤为：/n1）首先制备编码目标基因慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其辅助包装原件载体质粒，使用Buffer A进行共转染HEK293T细胞，转染后16-18h 更换为完全培养基，培养48~72h后，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，初步过滤后，将其进行浓缩得到高滴度的慢病毒浓缩液；/n2）取3-4周龄Lyz2-Cre小鼠股骨和胫骨，用含有10wt.%FBS，1wt.% P/S以及1wt.% NEAA的DMEM培养液冲洗骨髓腔，经 BD Falcon™ 100 µ m 细胞过滤网过滤，收集骨髓腔提取物，于4℃、1000g 离心10 min，弃上清，以5mL红细胞裂解液重新悬浮细胞，于室温下孵育1分钟；经PBS清洗后，用含有10wt.%FBS，10ng/mL IL-3，10ng/mL IL-6，10ng/mL Stem cellfactor的DMEM条件培养基重悬细胞，并计数种于10cm培养皿中，置CO₂培养箱中培养；/n3）细胞培养过夜后，收集悬浮细胞，于4℃、1000g 离心10分钟，弃上清；PBS液洗涤细胞2次；用10mL DMEM条件培养基重悬细胞，种板于12孔板，1mL/孔；每孔加入慢病毒，1800g，120分钟悬浮感染；后将细胞放入培养箱继续培养，隔天进行骨髓移植；/n4）（1）提前一周准备体重23-25g C57/B6小鼠，以抗生素水喂养一周，所述抗生素水组成为1L去离子水+100mg新霉素+10mg多粘菌素+700μL浓盐酸；（2）一周后，对步骤（1）C57/B6小鼠按7-9格雷剂量进行辐照；（3）步骤（2）辐照小鼠休息4-6小时后，收集病毒感染悬浮细胞，1000g，10分钟离心；用含10ng/mL IL-3，10ng/mL IL-6，10ng/mL stem cell factor的PBS洗涤细胞；弃上清，用PBS重悬细胞，将骨髓细胞尾静脉注射入辐照受体小鼠内完成模型制备。/n