[发明专利]对JEV易感的猪扁桃体细胞系的构建方法在审
| 申请号： | 201910736306.6 | 申请日： | 2019-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN110396502A | 公开（公告）日： | 2019-11-01 |
| 发明（设计）人： | 马志永;郗淑敏;刘珂;邵东华;魏建超;李蓓蓓;邱亚峰 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心） |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/65 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 马超前 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种对JEV易感的猪扁桃体细胞系的构建方法，该方法包含：获得原代猪扁桃体细胞，并进行培养；以pHY‑sv40‑Puro作为慢病毒载体，以psPAX2和pCMV‑VSV‑G作为辅助包装载体，共同转染进入293T细胞中，获得慢病毒颗粒；将慢病毒颗粒感染经培养后的原代猪扁桃体细胞系；经过感染后，将猪扁桃体细胞在含血清的DMEM/F12培养液中添加嘌呤霉素进行细胞筛选，获得阳性细胞；将阳性细胞用不含嘌呤霉素的培养液扩大培养，得到扁桃体上皮细胞传代细胞系。本发明的方法以猪扁桃体细胞作为宿主细胞，通过感染的方法得到JEV易感的猪扁桃体细胞系，该细胞系对JEV敏感，可以用于相关研究。 | ||
| 搜索关键词： | 猪扁桃体 细胞 慢病毒颗粒 阳性细胞 嘌呤霉素 构建 感染 培养液 传代 慢病毒载体 辅助包装 扩大培养 上皮细胞 宿主细胞 细胞筛选 扁桃体 血清 转染 敏感 研究 | ||
【主权项】：
1.一种对JEV易感的猪扁桃体细胞系的构建方法，其特征在于，该方法包含：获得原代猪扁桃体细胞，并在5％FBS的DMEM/F12培养基中进行培养，该培养基中添加100U/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素；以pHY‑sv40‑Puro作为慢病毒载体，以psPAX2和pCMV‑VSV‑G作为辅助包装载体，共同转染进入293T细胞中，获得含有慢病毒载体pHY‑SV40‑Puro的慢病毒颗粒，并采用2％FBS的DMEM培养；将所述慢病毒颗粒感染经培养后的原代猪扁桃体细胞系；经过所述感染后，将猪扁桃体细胞在含血清的DMEM/F12培养液中并添加嘌呤霉素进行细胞筛选，该嘌呤霉素的浓度为其对正常猪扁桃体细胞的最小致死浓度，获得阳性细胞；将所述阳性细胞用不含嘌呤霉素的5％FBS的DMEM/F12培养基扩大培养，构建得到对JEV易感的猪扁桃体细胞系。
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