[发明专利]一种基因融合的微流控检测设备及其使用方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，涉及一种基因融合的检测设备，具体涉及一种基因融合的微流控检测设备及其使用方法。本技术方案利用微流控技术对样本中的融合基因进行检测，该设备具有多重识别目的基因的功能，在实现高通量基因融合检测的同时降低了对复杂算法的需求以及降低了非特异性的探针杂交，检测过程更为简便快捷且具有更高的检测准确率和灵敏度。本设备适用于对融合基因进行检测，特别适合于对融合基因含量较低的样本进行检测。

主权项

1.一种基因融合的微流控检测设备，融合基因包括相互连接的片段A和片段B，片段A和片段B分别位于融合位置上游和下游，所述片段B为野生型基因的一个DNA片段，野生型基因还包括片段B’，片段B’和片段B相互连接且分别位于断裂位点上游和下游，其特征在于，检测设备包括微流控芯片、捕获链、探针和PCR反应体系；/n微流控芯片包括功能化的基板和微通道板，微通道板包括第一表面和与第一表面相对的第二表面，微通道板的第一表面上设置有至少两条不交叉的凹槽，在凹槽的两端设有贯穿第一表面和第二表面的通孔；微通道板的第一表面与功能化的基板密封接合，微通道板和基板之间形成供流体流通的微通道阵列，微通道阵列由至少两条不交叉微通道组成，微通道板和基板之间可拆卸；/n捕获链包括第一捕获链和第二捕获链，第一捕获链与片段A的正义链互补，第二捕获链与片段B’的正义链互补；捕获链由如下方法固定在基板上：将微通道板的第一表面与功能化的基板密封接合，第一次形成微通道阵列，第一次形成的微通道阵列中的微通道包括Ⅰ类微通道和Ⅱ类微通道两部分；将含第一捕获链的溶液注入Ⅰ类微通道，并将含第二捕获链的溶液注入Ⅱ类微通道，使捕获链固定在基板上，在基板上形成捕获链条带，然后将微通道板从基板上拆卸；/nPCR反应体系包括第一PCR反应体系和第二PCR反应体系，第一PCR反应体系用于获得第一PCR产物，第二PCR反应体系用于获得第二PCR产物；/n第一PCR反应体系包括第一引物对，第二PCR反应体系包括第二引物对；第一引物对用于扩增融合基因片段，融合基因片段由相互连接的片段A和片段B组成；第二引物用于扩增野生型基因片段，野生型基因片段由相互连接的片段B和片段B’组成；/n在基板上形成捕获链条带之后，第一PCR产物和第二PCR产物均用于与捕获链接触；第一PCR产物或第二PCR产物由如下方式与捕获链接触：将微通道板的第一表面与固定有捕获链条带的基板密封接合，第二次形成微通道阵列，第二次形成的微通道阵列中的微通道与捕获链条带之间形成交叉，交叉点为检测位点；在第二次形成的微通道阵列的微通道中注入单链化的第一PCR产物和/或单链化的第二PCR产物；第二次形成的微通道阵列的微通道包括Ⅰ’类微通道和Ⅱ’类微通道两部分；/n探针为连接有报告分子的单链DNA，包括第一探针和第二探针；第一探针与片段A的正义链互补，第一探针同片段A的结合区域和第一捕获链同片段A的结合区域相异，第二探针与片段B的正义链互补；探针用于确认已被捕获链所捕获的靶片段，探针由如下方式与靶片段结合：首先，单链化的第一PCR产物和/或单链化的第二PCR产物均与捕获链在微通道中接触并充分反应；然后，在Ⅰ’类微通道中注射入第一探针，并在Ⅱ’类微通道注射入第二探针，使第一探针与第一捕获链所捕获的片段A的正义链接触，并使第二探针与第一捕获链或第二捕获链所捕获的片段B的正义链接触。/n