[发明专利]一种山苍子叶肉细胞原生质体的制备方法有效
| 申请号： | 201910756254.9 | 申请日： | 2019-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN110358722B | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 陈昊;王阳;张付豪 | 申请（专利权）人： | 中南林业科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 长沙智路知识产权代理事务所(普通合伙) 43244 | 代理人： | 张毅 |
| 地址： | 410004 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： |
本发明公开的一种山苍子叶肉细胞原生质体的制备方法，包括以下步骤：获取无菌山苍子叶片；将无菌山苍子叶片切成条状碎块，置于酶解液中，黑暗条件下静置酶解6‑12小时，条状碎块与酶解液的质量体积比为1‑3：30‑50；将酶解完成后的酶解液进行过滤，取滤液经离心处理，弃上清液，得原生质体；在所得原生质体中加入原生质体洗涤液A，重悬原生质体；随后加入原生质体洗涤液B，离心后，收集液面分界处的原生质体细胞，即得。本发明提供的制备方法能够高效获取山苍子叶肉细胞原生质体，所得原生质体形态正常，无破损，每克鲜叶组织可获得(8.69±0.57)×10 |
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| 搜索关键词： | 一种 山苍子 叶肉 细胞 原生 质体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种山苍子叶肉细胞原生质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、材料选取：获取无菌山苍子叶片；步骤二、叶片酶解：将所述无菌山苍子叶片切成条状碎块，置于酶解液中，黑暗条件下静置酶解6‑12小时，所述条状碎块与所述酶解液的质量体积比为1‑3：30‑50，g/ml；所述酶解液中包括纤维素酶R‑10、离析酶R‑10、维生素C、PEG 4000和吐温80；步骤三、原生质体分离：将酶解完成后的酶解液进行过滤，取滤液经离心处理，弃上清液，得原生质体；步骤四、原生质体纯化：在步骤三所得原生质体中加入原生质体洗涤液A，重悬原生质体；随后加入原生质体洗涤液B，离心后，收集液面分界处的原生质体细胞，即得。
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